13ц уреаза тест: припрема, резултати, позитиван, негативан

Од открића бактерије Helicobacter pylori повезане са хроничним гастритисом и чиревима желуца и дванаестопалачног црева, развијене су дијагностичке методе, укључујући уреазни тест, који омогућава откривање ових микроорганизама код одређеног пацијента, потврђивање њихове умешаности у развој гастроинтестиналних болести и прописивање ефикасног лечења.

Ензим уреаза као биомаркер инфекције Helicobacter

Бактерије H. pylori се штите од киселе средине у лумену желуца на два начина. Прво, оштећујући слузокожу својим флагелама, микроорганизми доспевају до њених доњих слојева, све до епителних ћелија, где је pH виши (тј. киселост је нижа). Друго, бактерије неутралишу киселину синтезом великих количина каталитички активног високомолекуларног металоензима уреазе или уреа амидохидролазе.

Употреба уреазе у дијагнози Хеликобактерије је могућа не само због цитоплазматске активности овог ензима, већ и због спољашње интеракције са ћелијама домаћина.

Под дејством уреазе долази до разградње желудачне урее на водоник-нитрид (амонијак) и угљен-диоксид (угљен-диоксид). Они реагују са хлороводоничном киселином у желудачном соку и обезбеђују зону неутралне киселости око H. pylori, а такође подржавају метаболизам бактеријских ћелија.

Због тога је уреаза најважнији фактор у колонизацији H. pylori у људској желудачној слузокожи, а детекција уреолитичке активности се сматра биомаркером вируленције ове бактерије, који гастроентеролози – спровођењем уреазног теста – користе за дијагностиковање Helicobacter инфекције, као и за праћење резултата уништавања (ерадикације) бактерија изазваног лековима.

Дијагностика H. pylori инфекције обухвата инвазивне и неинвазивне тестове – у зависности од тога да ли је потребан ендоскопски преглед желуца (фиброгастродуоденоскопија) или не. Инвазивни тест је брзи уреазни тест или експресни уреазни тест (RUT-тест), који захтева узимање узорака ткива (биопсија). 13C уреазни тест у даху (13C-UBT) је најчешћи неинвазивни тест.

Треба напоменути да се неинвазивна дијагностика H.pylori може извршити помоћу анализе крви за антитела (специфичност на нивоу од 75%, осетљивост - 84%), ELISA теста у урину (са осетљивошћу од 96% и специфичношћу од 79%) и копрограма за бактеријске антигене. Више информација - Инфекција Helicobacter pylori: антитела на Helicobacter pylori у крви

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Индикације за процедуру уреаза тест

Колонизација желудачне слузокоже од стране H. pylori сама по себи није болест; она је фактор повећаног бактеријског оптерећења организма, што под одређеним условима може покренути развој бројних патологија желуца и горњег гастроинтестиналног тракта.

Индикације за дијагностику Helicobacter инфекције, посебно уреазног теста, повезане су са гастритисом са повећаном киселошћу, антралним и атрофичним гастритисом, дуоденитисом, чиром на желуцу и дванаестопалачном цреву, желудачним MALT лимфомом. Након ендоскопске ресекције рака желуца у раном стадијуму, хистолошки преглед се може извршити у комбинацији са брзим уреазним тестом - FGDS са уреазним тестом.

Гастроентеролози могу прописати уреаза тест ако се пацијенти жале на осећај тежине и нелагодности у епигастичном региону, честу горушицу након јела, кисело или труло подригивање, горчину у устима, мучнину, цревне поремећаје, болове или грчеве у желуцу.

[ 8 ], [ 9 ]

Припрема

Припрема за тест издахнућа са уреом 13C састоји се у томе да пацијент престане: узимати антибиотике 4 недеље пре теста, а НСАИЛ, инхибиторе протонске пумпе (смањење киселости желуца) и антациде или адсорбенте који се користе за горушицу - најмање две недеље раније. Узимање било којих лекова треба прекинути пет до шест дана, а пијење алкохола и пушење - три дана пре теста.

Такође се препоручује избегавање конзумирања махунарки око недељу дана пре тестирања, јер пасуљ, грашак, сочиво, соја и пасуљ садрже уреазу (која штити биљке од болести и инсеката штеточина).

Вече пре теста, касна обилна вечера је контраиндикована; на дан тестирања требало би да обављате нормалну оралну хигијену, а сат и по пре теста не би требало ништа да пијете или користите жвакаће гуме.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Техника уреаза тест

Техника имплементације:

• Прво се узима основни узорак дисања - издах се прави у меку пластичну посуду (и херметички се затвара);
• течност са додатком 13C-урее се узима орално;
• После 25-30 минута, други узорак издахнутог ваздуха се узима у другу посуду.

Узорци добијени на овај начин анализирају се на масеном спектрометру са раздвајањем изотопа у другом узорку и одређивањем њихове концентрације. Разлика између вредности у другом и првом узорку изражава се као делта (δ) у поређењу са основним нивоом. Нормалне вредности, односно негативне вредности обележеног атома 13C код неинфицираних пацијената варирају од 0,15-0,46%, а позитивне вредности у присуству инфекције су 1,2-9,5% са брзином хидролизе урее већом од 12-14 μг/мин.

Једноставно речено: детекција угљен-диоксида обележеног са 13C у издахнутом ваздуху указује на то да је уреа хидролизована ензимом уреазе H. pylori, што, заправо, потврђује чињеницу њеног присуства у желуцу.

Тест дисања на H. pylori

13C-UBT тест или 13C уреа тест издахнутог ваздуха за Helicobacter pylori једна је од најважнијих неинвазивних метода за откривање ове инфекције: са 100% осетљивошћу и 98% специфичношћу, ризик од лажно позитивних и лажно негативних резултата у поређењу са хистологијом и тестирањем крви на антитела је 2,3% мањи.

Анализа се заснива на хидролизи орално примењене течне урее обележене атомом угљеника (стабилни нерадиоактивни изотоп) 13C (50-75 мг 13C-урее разблажене у 100 мл течности) помоћу H. pylori уреазе.

Уреа обележена изотопским индикатором подлеже хидролизи у желуцу уз ослобађање амонијака и угљен-диоксида који садржи обележене атоме, који дифундује у крв и излучује се из плућа током дисања. Обележени угљен-диоксид се бележи аналитичким уређајем - масеним спектрометром, чији се рад заснива на недисперзивној изотопско-селективној спектроскопији, или инфрацрвеним спектроскопским анализатором.

Брзи тест уреазе

Брзи уреазни тест (РУТ) се изводи током ендоскопског прегледа желуца и дванаестопалачног црева - коришћењем савремених ендофиброскопа - и истовременим прикупљањем узорака биопсије. Биоматеријал се узима из антралног дела желуца. Дакле, фиброгастродуоденоскопија или ФГДС са уреазним тестом је инвазивна дијагностичка метода.

Добијена биопсија се потпуно урони у припремљену стандардизовану подлогу која садржи агар-гел, уреу, индикатор киселинско-базне равнотеже фенолсулфофталеин и бактериостатско средство (додато да би се спречио раст контаминирајућих микроорганизама и лажно позитивни резултати).

Ако су бактерије H. pylori присутне у узорку ткива желуца, уреаза коју производе ће хидролизовати уреу и повећати pH вредност, што је јасно видљиво како се индикатор мења из жуте у наранџасту (при pH 6,8) и љубичасту (при pH > 8). 75% позитивних тестова мења боју у року од 120-180 минута, а што брже индикатор мења боју, то је већи број бактерија. Али тестови који изгледају негативно чувају се 24 сата.

Брзи тест уреазе позитиван, шта то значи? Позитиван РУТ тест – индикатор постаје црвен – значи да узорак биопсије стављен у агар медијум садржи најмање 105 бактерија H. pylori, иако је њихова концентрација обично већа.

Осетљивост различитих модификација теста варира у распону од 90-98%, а специфичност – 97-99%.

Како су напоменули гастроентеролози, ако закључак пацијента указује на оштро позитиван уреазни тест (три крста), то значи: pH> 8, а индикатор је променио боју за мање од 60 минута од тренутка потапања биопсије, што указује на велики број H.pylori и висок ниво експресије уреазе. Приближан број бактерија може се избројати током хистолошког прегледа биопсије под микроскопом, а ако прелази 40-50 у визуализованом подручју, ниво инфекције се сматра високим.

13C уреа тест у даху ретко даје лажно позитивне резултате, а код пацијената са сумњом на чир на желуцу или дванаестопалачном цреву, један позитиван тест се сматра потврдом дијагнозе, док негативан резултат треба потврдити ЕГД-ом са уреа тестом.