Вирус хепатитиса А

Вирусни хепатитис А је заразна болест људи, коју карактерише првенствено оштећење јетре, а клинички се манифестује интоксикацијом и жутицом. Вирус хепатитиса А открио је 1973. године С. Фајнстоун (и др.) методом имуне електронске микроскопије и инфекцијом мајмуна - шимпанзи и мармозета. Суштина методе имуне електронске микроскопије је да се специфична антитела (конвалесцентни серум) додају филтрату фецеса пацијента са хепатитисом А и талог се подвргава електронској микроскопији. Због интеракције вируса са специфичним антителима, они подлежу специфичној агрегацији. У овом случају их је лакше детектовати, а агрегација под утицајем антитела потврђује специфичност патогена. Откриће С. Фајнстона је потврђено у експериментима на добровољцима.

Вирус хепатитиса А је сферног облика, пречник вириона је 27 nm. Геном је представљен једноланчаном позитивном РНК са mm 2,6 MD. Нема суперкапсида. Тип симетрије је кубни - икосаедар. Капсид има 32 капсомера, формиран је од четири полипептида (VP1-VP4). Према својим својствима, вирус хепатитиса А припада роду Heparnovirus, породици Picornaviridae. У погледу антигена, вирус хепатитиса А (HAV - hepatitis A virus) је хомоген. HAV се добро репродукује у телу шимпанзи, бабуна, хамадрија бабуна и мармозет мајмуна. Дуго времена вирус није могао да се култивише. Тек 1980-их је било могуће добити ћелијске културе у којима се HAV репродукује. У почетку су за ове сврхе коришћене континуиране ћелијске линије бубрега ембриона резус макака (култура FRhK-4), а сада се користи континуирана ћелијска линија ћелија бубрега зеленог мајмуна (култура 4647).

Према препорукама стручњака СЗО, усвојена је следећа номенклатура маркера вируса хепатитиса А: вирус хепатитиса А - ХАВ антитела на вирус хепатитиса А: анти-ХАВ IgM и анти-ХАВ IgG.

ХАВ је мала честица пречника 27-30 nm, која има икосаедарску симетрију и поседује хомогеност. Електрограм добијен методом имуноагрегације открива електрон-густе честице са површински лоцираним симетрично распоређеним капсомерима. Негативним контрастирањем, у препаратима се откривају и пуне и празне честице. Нуклеокапсид ХАВ-а, за разлику од грипа, нема површинске избочине и мембрану. Такође је важно да ХАВ вирион нема структуру у облику срца.

На основу својих физичко-хемијских својстава, вирус хепатитиса А је класификован као припадник породице пикорнавируса, рода ентеровируса са серијским бројем 72. Међутим, ова таксономија се показала превише неуобичајеном, па је СЗО сматрала могућим да задржи терминологију „вирус хепатитиса А“.

Као и сви вируси из породице Picornaviridae, вирус хепатитиса А садржи рибонуклеинску киселину. Неке лабораторије су показале могућност клонирања генома вируса хепатитиса А, што отвара перспективу добијања вакцина.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Отпорност на вирус хепатитиса А

Вирус је релативно отпоран на високе температуре, киселине, раствараче масти (нема липиде), дезинфекциона средства, а добро подноси ниске температуре. Све ово доприноси његовом дугорочном очувању у спољашњој средини. На собној температури преживљава неколико недеља, на 60 °C делимично губи заразност након 4-12 сати, а потпуно - након неколико минута на 85 °C. Веома је отпоран на хлор, због чега је у стању да продре у воду из славине кроз баријере постројења за пречишћавање воде.

Сумирајући све податке, можемо окарактерисати вирус хепатитиса А на следећи начин:

• природни домаћин је човек;
• експерименталне животиње - мармозети, шимпанзе;
• извор инфекције је фецес;
• болест је епидемијска и ендемска;
• пут преноса: фекално-орални;
• период инкубације - 14-40 дана;
• прелазак на хронични хепатитис - није примећен.

Имунолошка својства ХАВ-а су следећа:

• Прототипски сојеви - Ms-1, CR-326, GВG. Сви су имунолошки слични или идентични;
• Антитела - IgM и IgG, производе се као одговор на уношење структурних протеина вируса и имају заштитна својства;
• I. Заштитни ефекат хуманог серумског гама глобулина - спречава или ублажава болест ако се примени пре инфекције или током периода инкубације.

Физичко-хемијске карактеристике НАУ су следеће:

• Морфологија: сферна честица без љуске са кубном симетријом, капсид се састоји од 32 капсомера;
• Пречник - 27-30 нм;
• Густина у CsCl (г/цм3) - 1,38-1,46 (отворене честице), 1,33-1,34 (зрели вириони), 1,29-1,31 (незрели вириони, празне честице);
• Коефицијент седиментације - 156-160 зрелих вириона;
• Нуклеинска киселина је једноланчана, линеарна РНК;
• Релативна молекулска тежина - 2,25 × 10⁶-2,8 × 10⁶KD;
• Број нуклеотида је 6.500-8.100.

Стабилност ХАВ под физичким и хемијским утицајима је следећа:

• Хлороформ, етар - стабилан;
• Хлор, 0,5-1,5 мг/л, 5 °C, 15 мин - делимична инактивација;
• Хлорамин, 1 г/л, 20 °C, 15 мин - потпуна инактивација;
• Формалин, 1:4000, 35-37 °C, 72 h - потпуна инактивација, 1:350, 20 °C, 60 min - делимична инактивација.

Температура:

• 20-70 °C - стабилно;
• 56 °C, 30 мин - стабилно;
• 60 °C, 12 h - делимична инактивација;
• 85 °C, 1 мин - потпуна инактивација;
• Аутоклавирање, 120 °C. 20 мин - потпуна инактивација;
• Сува топлота, 180 °C, 1 сат - потпуна инактивација;
• НЛО, 1,1 W, 1 мин - потпуна инактивација.

Приказани подаци показују да је по својим физичко-хемијским својствима вирус хепатитиса А најближи ентеровирусима. Као и други ентеровируси, HAV је отпоран на многе дезинфекционе растворе и потпуно се инактивира у року од неколико минута на 85 °C и аутоклавирању.

Доказано је да се вирус хепатитиса А може репродуковати у примарним и континуираним монослојним линијама ћелијских култура човека и мајмуна. Посебно активна репродукција вируса хепатитиса А у in vitro културама примећена је када се као полазни материјал користе екстракти јетре болесних мајмуна. Треба, међутим, напоменути да се у свим експериментима репродукције вируса хепатитиса А на in vitro културама скреће пажња на дуг период инкубације током примарних пасажа (до 4-10 недеља), након чега се акумулација вирусног генетског материјала повећава, али апсолутне вредности остају веома безначајне, што даје основа многим истраживачима да говоре о непотпуној репликацији вируса хепатитиса А у културама ткива.

Сумирајући литературне податке о репродукцији вируса хепатитиса А у екстраткивним културама, може се рећи да је чињеница дугорочног преживљавања ХАВ ин витро несумњива. Оптимални услови за стабилан висок ниво репликације вируса нису коначно идентификовани, а то отежава проучавање његових биолошких својстава, добијање извора реагенса за производњу дијагностике и дизајн вакцина.

Истовремено, у литератури се могу наћи оптимистичнији судови о овом проблему. Решење свих питања везаних за култивацију вируса хепатитиса А је ствар блиске будућности. Приликом проучавања оптималних услова за репродукцију HAV у култури ембрионалних ћелија бубрега резус макакија, идентификоване су две фазе: фаза производње инфективног вируса (до 6-8 дана на нивоу 5. пасажа) и фаза интензивне акумулације вирусног антигена. Такође је показано да се најзначајнија акумулација вирусног антигена дешава у условима такозваног култивисања ваљком (ротирајућих боца). Ова метода отвара широке могућности за добијање културног антигена у великим количинама, а самим тим и изворни материјал за припрему дијагностичких система и производњу вакцина.

Епидемиологија хепатитиса А

Вирус хепатитиса А је високо патоген за људе. Према СЗО (1987), инфекција са само једним вирионом је довољна да изазове болест. Међутим, практична инфективна доза је вероватно много већа. Једини извор инфекције је заражена особа. Вирус се излучује у великим количинама фецесом 12-14 дана пре појаве жутице и током 3 недеље иктеричног периода. Нису пронађене значајне разлике у излучивању патогена код пацијената са иктеричним, аниктеричним и асимптоматским облицима хепатитиса А. Пут инфекције је фекално-орални, углавном путем воде, као и кућни и алиментарни. Пут инфекције је фекално-орални, углавном путем воде, као и кућни и алиментарни. Главни (примарни) пут преношења вируса је путем воде. Могућа је и инфекција капљицама у ваздуху. Осетљивост популације је универзална. Углавном су погођена деца млађа од 14 година. Болест има изражену јесење-зимску сезоналност.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Симптоми хепатитиса А

Период инкубације варира од 15 до 50 дана, у зависности од инфективне дозе вируса, али у просеку износи 28-30 дана. Једном када се нађе у организму, вирус хепатитиса А се размножава у регионалним лимфним чворовима, продире у крв, а затим у ћелије јетре и изазива акутни дифузни хепатитис, који је праћен оштећењем хепатоцита и ретикулоендотелних елемената јетре и смањењем њене детоксикационе и баријерне функције. Оштећење хепатоцита настаје не због директног дејства вируса, већ као резултат имунопатолошких механизама. Најтипичнија слика хепатитиса А је акутни иктерични циклични облик: период инкубације, продромални (преиктерични), иктерични период и реконвалесценција. Међутим, у жариштима инфекције открива се велики број пацијената са аниктеричним и асимптоматским облицима инфекције, чији број значајно преовлађује над иктеричним („феномен леденог брега“).

Постинфекциони имунитет је јак и дуготрајан, узрокован антителима која неутралишу вирус и ћелијама имуне меморије.

Микробиолошка дијагностика хепатитиса А

Дијагностика хепатитиса А (осим инфекције животиња - шимпанзи, мармозета, бабуна, које немамо) заснива се на различитим имунолошким методама: RSC, имунофлуоресцентна метода, хемаглутинација имунолошке адхезије (комплекс вирусног антигена + антитела у присуству комплемента се адсорбује на еритроците и изазива њихово лепљење). Међутим, могућности коришћења ових метода су ограничене због недостатка специфичних вирусних антигена, а имунофлуоресцентна реакција захтева биопсију јетре, што је непожељно. Метода имунолошке електронске микроскопије је поуздана и специфична, али је веома радно интензивна. Стога је до сада једина прихватљива имунолошка реакција метод имуносорбентне анализе чврсте фазе у облику IFM или RIM, посебно у модификацији „хватања“ имуноглобулина класе М. У нашој земљи је за ову сврху предложен тест систем - „DIAGN-A-HEP“. Принцип рада овог тест система је следећи. Прво се антитела на имуноглобулине класе М (антиимуноглобулини М) сорбују на зидовима полистиренских јажица, затим се додаје пацијентов серум који се тестира. Ако садржи IgM антитела, она ће се везати за анти-антитела класе М, затим се додаје специфични вирусни антиген (вирус хепатитиса А), који се добија узгојем у ћелијској култури. Систем се испира, а у њега се додају антивирусна антитела обележена пероксидазом рена. Ако све четири компоненте система интерагују, формира се четворослојни „сендвич“:

• антиимуноглобулини М,
• имуноглобулини М (против вируса хепатитиса А - у серуму пацијента који се испитује),
• вирусни антиген,
• ензимски обележена антивирусна антитела.

Да би се детектовао овај комплекс, у бунариће се додаје супстрат за ензим. Под утицајем ензима, он се уништава и формира се обојени производ. Интензитет боје може се квантитативно мерити помоћу спектрофотометра или фотоколориметра.

Предност методе „хватања“ IgM је у томе што се антитела ове класе имуноглобулина појављују током примарног имунолошког одговора и указују на активну фазу инфекције, нестају након прележане болести. Антивирусна антитела која припадају IgG класи, напротив, опстају дуго након прележане болести, обезбеђујући стечени имунитет. За детекцију вируса хепатитиса А предложена је метода ДНК сонде: као сонда се користи комплементарна vRNA ДНК.

Лечење хепатитиса А

Због чињенице да је производња интерферона поремећена код вирусног хепатитиса, лечење хепатитиса А заснива се на употреби интерферона и индуктора његове ендогене синтезе, амиксина.

Специфична превенција хепатитиса А

Раније широко коришћена серопрофилакса хепатитиса А гама глобулином није се оправдала, стога је главни нагласак стављен на спровођење вакциналне профилаксе, спроводи се вакцинација против хепатитиса А. У ту сврху се развијају и већ користе различите врсте вакцина. У Русији је ефикасна вакцина против хепатитиса А добијена још 1995. године и сада се успешно користи.