Конфокална микроскопија

Конфокална микроскопија се тренутно сматра једном од најперспективнијих метода за снимање коже in vivo, због чега је интересовање за њу необично велико и међу клиничарима и међу представницима истраживачких института.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Могућности конфокалне микроскопије

У дерматологији, конфокална ласерска микроскопија се користи за:

• проучавање продирања једињења у кожу (путеви продирања, кинетика, дистрибуција у кожи);
• посматрање функционисања жлезда (одређивање активног и пасивног стања);
• студије микроциркулаторног корита (укључујући и у реалном времену);
• дијагностика неоплазми.

Без разматрања предности и мана горе поменутих врста конфокалне микроскопије, напомињемо да је последњих година флуоресцентна ласерска конфокална микроскопија постала све популарнија.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Конфокална микроскопија за преглед коже

Конфокални микроскоп пружа две непроцењиве могућности - проучавање ткива на ћелијском нивоу у стању физиолошке виталне активности и демонстрацију резултата проучавања (тј. ћелијске активности) у четири димензије - висини, ширини, дубини и времену. За квалитет слике и дубину проучавања, најважнију улогу игра способност ткива да пропушта светлост, другим речима, његова транспарентност. Метода конфокалне микроскопије је бесконтактна, светлосни сноп не наноси никакву штету или нелагодност пацијенту који се испитује или експерименталној животињи.

Конфокална скенирајућа ласерска микроскопија (КСЛМ) се користи за испитивање коже. Метода омогућава да се виде епидермис и папиларни слој дермиса са резолуцијом блиском хистолошкој. Сви резултати испитивања се приказују на монитору и чувају као пакет сликовних датотека (као микрофилм (у динамици) или микрофотографије).

Постоје две врсте методе:

• рефлективни (рефлексија CSLM) - заснован на чињеници да различите интрацелуларне и међућелијске структуре имају различите индексе преламања светлости, што омогућава добијање контрастне слике.
• флуоресценција (флуоресценција CSLM) - користи ласерску светлост која продире кроз кожу и побуђује егзо- или ендохромофоре у њој, који као одговор почињу да емитују фотоне (тј. флуоресцирају).

Латерална резолуција је минимално растојање између тачака које се налазе на хоризонталној равни, односно равни паралелној површини коже. Аксијална резолуција је минимално растојање између тачака које се налазе на равни нормалној на површину коже.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Историја конфокалне микроскопије

Идеја о стварању микроскопа способног да прикаже пресек живог ткива на ћелијском нивоу активно је развијена пре 130 година. Главни елемент модерних микроскопа дизајниран је крајем 19. века и био је ротирајући диск са ситним рупицама распоређеним у спиралу. Овај диск је изумео 1883. године немачки студент Паул Нипков, по коме је и добио име - Нипковљев диск (или Нипковљев диск). Изум се заснивао на способности светлости, која пролази кроз ситне рупице на диску и увећавајуће сочиво, да продре дубоко у ткиво и осветли фрагмент ћелије на одређеној удаљености од површине. Када се диск брзо ротира, фрагменти формирају јединствену слику. Померањем структуре даље од или ближе објекту, могуће је мењати дубину оптичког пресека ткива које се проучава.

Тек појавом видео рекордера осамдесетих година прошлог века и рачунара способних за обраду слика почетком деведесетих година прошлог века, постало је могуће креирати и ефикасно користити савремене микроскопе који се данас користе.