Ограничења, опасности и компликације трансплантације ћелија

Пластиц-регенеративне медицине заснива се на реализацији у плурипотентних ембрионалних матичних и родитељских ћелија клиници и тоти- особине, омогућавајући ин витро и ин виво да створе унапред одређеном ћелијске линије репопулације оштећених ткива и органа хуманог пацијента.

Прави прилика за терапеутску употребу ембрионалних матичних ћелија и матичне ћелије дефинитивне ткива (тзв "за одрасле" матичне ћелије - одраслих матичних ћелија) особа више није под знаком питања. Међутим, стручњаци на Националним и медицинским академијама Сједињених Америчких Држава (САД) препоручују детаљније проучавање особина матичних ћелија у експериментима на адекватним биолошким моделима и објективно процијенити све посљедице трансплантације, а тек онда користити матичне ћелије у клиници.

Утврђено је да су матичне ћелије део ткивних деривата свих три ембрионална летка. Матичне ћелије се налазе у ретини, рожњаче, коже, епидерм, коштане сржи и периферне крви, у судовима, пулпа зуба, бубрега, епител дигестивног тракта, панкреаса и јетре. Уз помоћ модерних метода доказано је да су стемне неуронске ћелије локализоване у мозгу и кичмену мождину одраслих. Ови сензационални подаци привукли су посебну пажњу научника и медија, јер су неурони мозга служили као класичан примјер популације статичне ћелије која се не опоравља. Обе ране и касне периоди онтогенеза због нервних матичних ћелија у људском и животињском мозгу генерише неурона, астроцитима и олигодендроцита (Матичне ћелије: научни напредак и будући истраживачки правци Нац Инст, за здравство САД ..).

Међутим, у нормалним условима пластичност матичних ћелија дефинитивних ткива се не појављује. За реализацију пластичног потенцијала матичних ћелија дефинитивних ткива, они морају бити изоловани и затим култивисани у медијима са цитокинима (ЛИФ, ЕГФ, ФГФ). Осим тога, деривати матичних ћелија успешно преживе само када се трансплантирају у тело животиње са депресираним имунолошким системом (γ-зрачење, цитостатици, бусулфан итд.). До данас није било убедљивих доказа о пластичности матичних ћелија код животиња које нису биле озрачене или на други начин изложене дубокој имуносупресији.

У таквим околностима, опасне потенција ПГЦ испољавају се најприје у њиховој ванматеричне трансплантације подручју - поткожном ињекцијом ЕСК имунодефицијентни мишеви на месту ињекције формиране тератокарцином. Даље, током хуманог ембрионалног развића учесталост хромозомских абнормалности него у ембриогенезу код животиња. У бластоциста фази само 20-25% хуманих ембриона се састоје од ћелија са нормалним кариотип, ау највећем броју раних људских ембриона добијених након оплодње ин витро, хромозомски мозаицизам детектован хаотичне и врло честе нумеричких и структурних аберација.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]

Користан ефекат матичних ћелија

Прелиминарни резултати клиничких испитивања потврђују благотворност ефекта матичних ћелија на пацијента, али до сада нема података о дугорочним последицама трансплантације ћелија. У литератури, првобитно доминирају извештаји о позитивним резултатима трансплантације сржи фрагмената ембриона код Паркинсонове болести, али онда почео да се појављује податке негирају ефективне терапеутске ефекте ембрионални или феталне нервно ткиво пресађене у мозговима пацијената.

У средини КСКС века рестаурација хематопоезе је откривен смртно озраченим животиња након интравенског трансфузије коштане сржи, а 1969. Амерички истраживач Д. Тхомас извели прву трансплантацију коштане сржи човека. Недостатак знања о механизмима имунолошког некомпатибилност коштане сржи даваоца и примаоца, док узрокована високим морталитетом услед честих непризхивленииа графта и развој реакција "графт версус хост". Откриће главног комплекса гена ткивне подударности, која се састоји од хуманог леукоцита антигена (ХБА), и унапређења метода куцате је могуће значајно повећати стопу преживљавања после трансплантације коштане сржи, што је довело до широко распрострањеног ове методе лечења у онкологију и хематологију. Након деценије извршена је прва трансплантација хематопоетских матичних ћелија (ХСЦ) добијених из периферне крви уз помоћ леукаферезе. 1988. У Француској за лечење детета са Фанконијева анемија као извора ХСЦС је први пут користи пупчане врпце, и крајем 2000. У штампи почели да се појављују о способности ХСЦС да диференцирају у ћелије различитих типова ткива које потенцијално проширује опсег њихове клиничке примене. Међутим, показало се да материјал за трансплантацију, заједно са ГСК, садржи значајну количину не-хемопоетских ћелија, које су разноврсне по природи и својствима. У вези са овим се развијају методе за пречишћавање графта и критеријуме за процену његове ћелијске чистоће. Конкретно, користи се позитивна имуносликација ЦД34 + ћелија, што омогућава изолацију ХСЦ уз помоћ моноклонских антитела.

[13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23]

Компликације терапије матичним ћелијама

Компликације трансплантације коштане сржи најчешће су хематолошке и повезане су са продуженим периодом јатрогене панцитопеније. Најчешће инфекције су анемија, анемија и крварење. У том смислу, изузетно је важно одабрати оптимални начин узорковања, обраду и складиштење коштане сржи за максимално очување матичних ћелија, што ће осигурати брз и стабилан опоравак хематопоезе. Код карактеризације трансплантата, тренутно је прихваћено да вреднује следеће параметре: број мононуклеарних и / или нуклеованих ћелија, јединица за формирање колонија и садржај СБ34-позитивних ћелија. Нажалост, ови показатељи само пружају индиректну процену стварне хематопоетске способности популације трансплантата матичних ћелија. За данас постоје апсолутно прецизни параметри за одређивање довољности трансплантата за дуготрајни опоравак хемопоезе код пацијената чак иу аутологној трансплантацији коштане сржи. Развој заједничких критеријума је изузетно тешко због недостатка крутих стандарда обраде, криопрезервације и испитивања графта. Поред тога, неопходно је узети у обзир разноврсност фактора који утичу на параметре успешног опоравка хематопоезе код сваког пацијента. У аутологне трансплантације коштане сржи Најважнији од њих је број претходних режима, нарочито уредјај режим, период болести, која се производи у коштаној сржи цоллецтион шеме примене фактори стимулације колонија у посттрансплант периоду. Поред тога, не треба заборавити да се хемотерапија која претходи феталном графтингу може негативно утицати на матичне ћелије коштане сржи.

Инциденца тешких токсичних компликација значајно се повећава са алогено трансплантацијом коштане сржи. У вези с тим, интересни су статистички подаци о трансплантацији алогене коштане сржи у таласемији. Извештаји Европске трансплантације коштане сржи групе регистровано око 800 трансплантацију коштане сржи код болесника са Тхалассемиа мајор. Алогена трансплатација ин таласемије у већини случајева обавља у ХЛА-идентичног сиблингс, који је повезан са озбиљним компликацијама и повећаног морталитета у трансплантацији матичних ћелија материјал који делимично компатибилни или прилагођено неповезаних донатора. У циљу минимизирања ризика фаталних инфективних компликација, пацијенти су смештени у изолованом асептичним кутији са протоком ламинарни, при крају или абацтериал диет. За бактеријску деконтаминацију црева пер ос преписују не-ресорпцијске облике антибиотика, антимикотичних лекова. У циљу спречавања интравенска амфотерицин Б. Превенција системских инфекција фиксних амикацин и Цефтазидим, који обухвата дан пре трансплантације, настављајући третман за пражњење пацијената. Сви препарати крви пре зрачења су зрачени у дози од 30 Ги. Парентерална исхрана током трансплантације је предуслов и почиње одмах природним ограничавањем уноса хране.

Један број компликација повезаних са висока токсичност имуносупресивних лекова, који често узрокују мучнину, повраћање и мукозитиса, бубрежна оштећења и интерстиналну пнеумонију. Једна од најтежих компликација хемотерапије је вено-оклузивна болест јетре, што доводи до смрти у раном периоду после трансплантације. Међу факторима ризика за настанак тромбозе портала система јетре треба напоменути старост пацијента, присуство хепатитиса и фиброзе јетре, држећи имуносупресивне терапије после трансплантације коштане сржи. Веноокклиузионнаиа болест је нарочито опасна у таласемије, који је праћен хемосидерозе фиброза јетре и хепатитис - честе сателити транс- фусионал терапију. Венска тромбоза портала система јетре развија унутар 1-2 недеље након трансплантације и одликује брзим порастом билирубина у крви и трансаминаза, прогресивна хепатомегалија, асцитес, енцефалопатија, и бол у горњем делу стомака. Хистолошки Аутопсија материјал дефинисано у оштећења ендотела, субендотелном крварења, лезијама тсентролобулиарних хепатоцита, тромбоза опструкције јетре венула и централном венском. Код пацијената са таласемијом описани су случајеви фаталних срчаних застоја повезаних са токсичним ефектима цитостатике.

У припреми за трансплантацију, циклофосфамид и бусулфан често узрокују токсични хеморагични циститис са патолошким променама у уроепителијалним ћелијама. Коришћење циклоспорина А у трансплантацији коштане сржи често праћена ефектима нефротокси и неуротоксичност, хипертензивних синдром, задржавање течности и цитолиза хепатоцита. Кршење сексуалне и репродуктивне функције се чешће примећује код жена. У малој деци после трансплантације пубертски развој обично не трпи, али код старије деце патологија развоја гениталне сфере може бити веома озбиљна - све до стерилитета. Компликације које су директно везане за саму трансплантацију укључују одбацивање алогених ћелија коштане сржи, некомпатибилност у АБО систему, акутне и хроничне форме реакције "графт версус хост".

У пацијента након трансплантацију АБО-некомпатибилан коштане сржи типа идиоагглутинин "домаћин против донатора АБО" произведен у 330-605 дана после трансплантације, што може довести до продуженог хемолиза и наглим порастом потребе за трансфузију крви. Саид компликација се спречава трансфузије еритроцитима група само 0. Трансплантације у великом броју пацијената аутоимуни неутропенија, тромбоцитопенија, панцитопеније, или за корекцију коју мора да изврши одстранимо слезину.

У 35-40% прималаца акутне реакције "графт версус хост" развија року од 100 дана после трансплантације алогенеичне хемоглобина идентичне коштане сржи. Степен кожних лезија, јетру и црева варира од осип, хипербилирубинемији, дијареја и блага према десквамације коже, цревне опструкције и акутног отказивања јетре. Пацијенти са Таласемија фреквентним акутним реакциону "графт версус хост" И степена после трансплантације коштане сржи је 75%, ИИ и виши степен - 11-53%. Цхрониц Реакција "графт версус хост" као системски мултиорганске синдрома обично развије током 100-500 дана после трансплантације алогенеичне коштане сржи у 30-50% пацијената. Погађају се кожа, уста, јетра, очи, једњак и горњи респираторни тракт. Разликовати ограничени облик хроничне реакције "графт версус хост" када су погођени коже и / или јетре, и раширена, генералисане промене на кожи у комбинацији са хроничним агресивним хепатитисом, очне болести, пљувачних жлезда или било којем органу. Узрок смрти је често инфективна компликација која је резултат тешке имунодефицијенције. У Таласемија хроничног блажи облик реакционе "графт версус хост" нађена у 12%, умерено - 3% и тешка - имају 0,9% примаоца ХЛА-компатибилних алогеној коштане сржи. Озбиљна компликација у трансплантацији коштане сржи је одбацивање трансплантата, који се развија 50-130 дана након операције. Фреквенција одбијања зависи од начина кондиционирања. Конкретно, пацијенти са таласемије третирано током припреме само метотрексата, одбацивање коштане сржи графта посматрати у 26% случајева, комбинације метотрексата са циклоспорина А - 9%, а када додељује само циклоспорин А - 8% случајева (Хазииев етц. ., 1995).

Инфективне компликације после трансплантације коштане сржи изазване вирусима, бактеријама и гљивицама. Њихов развој је повезан са дубоким неутропеније, која је индукована током хемотерапије условљавања, цитостатици победи слузнице баријере и реакције "графт версус хост". У зависности од времена развоја, постоје три фазе инфекције. У првој фази (развија у првом месецу после трансплантације) доминира оштећење мукозе баријере и неутропенија, често праћене вирусних инфекција (херпес, Епстеин-Барр вирус, цитомегаловирус, Варицелла зостер), као инфекција изазваних грамполозхи - инфламаторним и Грам-негативне бактерије, Цандида Фунги , аспергилома. У раним после трансплантације периоду (друга и трећа месеци после трансплантације) је најтежи цитомегаловирусна инфекција, што често доводи до смрти пацијената у другој фази инфекције. Таласемија цитомегаловирусна инфекција после трансплантације коштане сржи се јавља у 1.7-4.4% прималаца. Трећа фаза се посматра у касном периоду после трансплантације (три месеца после операције), а одликује тешком комбинованом имунодефицијенције. Овај период је обично наћи инфекције изазване варичела зостер, стрептокока, Пнеумоцистис Царини, Неиссериа менингитидис, Хаемопхилус инфлуензае, и хепатотропним вирусима. Морталитет Таласемија болесника после трансплантације коштане сржи повезан са бактеријских и гљивичних сепса, идиопатски интерстицијални и цитомегаловирус пнеумоније, акутни респираторни дистрес синдром, акутна срчана инсуфицијенција, срчана тампонаде, церебрална хеморагија, болести веноокклиузионнои јетре и акутног реакциона "графт версус хост".

Тренутно је постигнут одређени напредак у развоју метода за изолацију из коштане сржи чисте популације ћелија хемопоетских ћелија. Техника добијања феталне крви из пупчане врпице побољшана је и развијена су метода за изоловање ћелија формирајућих крвова од крви из пупчане крви. У научној штампи постоје извештаји да су, када се култивишу у медијима са цитокинима, хематопоетске матичне ћелије способне за множење. Приликом коришћења специјално дизајнираних биореактора за експанзију ХСЦ, биомаса матичних ћелопоетских ћелија изолованих из коштане сржи, периферне или пандиреве крви је значајно повећана. Могућност експанзије ХСЦ-а је важан корак у клиничком развоју трансплантације ћелија.

Међутим, пре узгој ин витро ГСК неопходно издвојити хомогену популацију хемопоиетиц матичних ћелија. То се обично постиже употребом маркера, омогућавајући селективно обележавања ХСЦ моноклонална антитела ковалентно везане на магнетну или флуоресцентни маркер, и изаберите их са погодним ћелија сортирач. Истовремено, питање фенотипских карактеристика хематопоетских матичних ћелија није коначно решено. А. Петренко., В. Хрисцхенко (2003) као кандидата за ГСК третиране ћелије, које су присутне на површини ЦД34, АЦ133 и диметил антигена и без ЦД38, ХЛА-ДР и других маркера диференцијације (ћелија са фенотип ЦД34 + лира). Линеарних маркера диференцијације (Линеаге, Лин) обухватају глицопхорин А (ГПА), ЦД3, ЦД4, ЦД8, ЦД10, ЦД14, ЦД16, ЦД19, ЦД20 (Муенцх, 2001). Сматрао обећавајући за трансплантацију ћелија са фенотипом ЦД34 + ЦД45РалуВ ЦД71лов, као ЦД34 + диметил + ЦД38лов / Ц-кит / лов.

Проблем броја ХСЦ који је довољан за ефикасно трансплантацију остаје проблем. Тренутно, извор ћелија за формирање крвних зрнаца су костна срж, периферна и пужна крв, као и ембрионална јетра. Ширење матичних хемопоетских ћелија се постиже култивацијом у присуству ендотелиоцита и хематопоетских фактора раста. У различитим протоколима, миелопротеини, СЦФ, еритропоетин, фактори раста слични инсулину, кортикостероиди и естрогени се користе да индукују пролиферацију ХСЦ. Када се комбинације цитокина користе ин витро, значајно повећање ХСЦ базена може се постићи врхунцем њиховог ослобађања на крају друге недеље одгајања.

Традиционално, ХСЦ пандемија се углавном користи у хемобластозама. Међутим, минимална доза хематопоетских ћелија неопходних за успешно трансплантацију ћелија крвних судова је 3.7 к 10 ⁷ нуклеираних ћелија на 1 кг телесне тежине примаоца. Коришћење мањих количина ХСЦ значајно повећава ризик од отказа графта и рецидива болести. Због тога се трансплантација ћелија које се формирају у крви крви пупчане врпце углавном користе у лечењу хемобластозе код деце.

Нажалост, још увек не постоји стандардна празно, и стандардизоване протоколе клиничка примена ћелија крви из пупчаника хематопоетских. Сходно сами матичне ћелије пупчане крви нису законски призната као извор хематопоетских матичних ћелија за трансплантацију. Поред тога, нема етичких или правна правила која регулишу активности и организација банака пупчане кровб који су доступни у иностранству. У међувремену, за сигурност трансплантације пупчане врпце, сви узорци треба пажљиво пратити. Пре узимања узорака крви на почетку труднице морају добити пристанак на то. Сваки прегнант мора бити испитано на превоз ХБсАг, антитела на вирус хепатитиса Ц, ХИВ и сифилис. Сваки узорак крви из пупчаника мора тестирати на стандардним бројем једром ћелија и ЦД34 + колонија формирања способности. Осим тога, ХбА врши куцање, крвне групе АБО и њеног чланства у тој фактора Рх. Процедуре тестирања су потребни усева на бактериолошко стерилитета, серолошке дијагностике за ХИВ-1 и ХИВ-2 инфекције, ХБсАг, хепатитис Ц вирус, цитомегаловирус инфекција, НТЛИ НТЛИ-1 и ИИ, сифилис, токсоплазмоза. Поред тога, за детекцију цитомегаловирус и ХИВ полимераза ланчаном реакцијом врши. Чини прикладно допуњује анализу протокола тестирања крви пупчаника ХСЦС да идентификују такве генетске болести попут Таласаемија и сицкле ћелија анемије, аденозин деаминаза недостатак, агамаглобулинемију Брутон, болести Харлера и играчима.

У следећој фази припреме за трансплантацију поставља се питање очувања ГСК-а. Најопаснији за одрживост ћелија приликом њиховог припрема су поступци замрзавања и одмрзавања. Када се замрзну хемопоетске ћелије, значајан део њих може бити уништен због кристалне формације. Да би се смањио проценат ћелијске смрти, користе се посебне супстанце - криопротектанти. Најчешће, као криопротектант, ДМСО се користи при коначној концентрацији од 10%. Међутим, за ДМСО, ова концентрација се карактерише директним цитотоксичним ефектом, који се манифестује чак иу условима минималног излагања. Смањена цитотоксични ефекат постиже одржавањем круту нула температуре режим експозиције и усклађености регулације обраду материјала током и након одмрзавања (брзину свих манипулација пријављујете више поступака пари). Не примењујте ДМСО концентрацију мању од 5%, јер у овом случају масовна смрт хематопоетских ћелија долази током периода замрзавања.

Присуство нечистоћа црвених крвних зрнаца у смеши суспензије ГСК ствара опасност да се развије реакција некомпатибилности за антигене еритроцита. У исто време, уз уклањање еритроцита, губитак хематопоетских ћелија знатно се повећава. С тим у вези, предложен је метод за нефракционисано одвајање ГЦС. У том случају, да заштити једром ћелије од штетних ефеката нижим температурама користећи 10% раствора ДМСО и хлађења при константној брзини (ХС / мин) на -80 ° Ц, након чега је суспензија ћелија је замрзнут у течном азоту. Сматра се да се овим техником криопорезервације одвија делимична лиза еритроцита, па узорци крви не захтевају фракционисање. Пре трансплантације, суспензија ћелија се одмрзава, опрана од хемоглобина и ДМСО у раствору хуманог албумина или серума. Очување хематопоезе претка користећи ову методу је заиста већа него после фракционирањем врпце, али опасност од компликација услед трансфузије АБО-неспојиво трансфузија еритроцита који се чувају.

Успостављање система банака за складиштење ХСЦ тестираних и ХСЦ узорака могло би да реши горе наведене проблеме. Међутим, за ово је неопходно развити етичке и правне норме, о којима се и даље расправља. Пре стварања банкарске мреже неопходно је усвојити низ одредби и докумената о стандардизацији процедура за узорковање, фракционисање, тестирање и типкање и криоконсервацију ГЦВ-а. Предуслов ефикасне активности банака ГСК је организација компјутерских база података за однос са донатор коштане сржи региструје Светска асоцијација (ВМДА) и Национални донатор коштане сржи Сједињених Америчких Држава програма (НМДП).

Поред тога, неопходно је оптимизовати и стандардизовати методе ХСЦ експанзије ин витро, првенствено хематопоетске ћелије крви из пупчане врпце. Репродукција ХСЦ пандиреве крви је неопходна да би се повећао број потенцијалних прималаца који су компатибилни са ХЛА системом. Због малих количина крви из пупчане врпце, количина ХСЦ садржане у њему, по правилу, није у стању да обезбеди репопулацију коштане сржи код одраслих пацијената. Истовремено, за спровођење неповезаних трансплантација, неопходно је имати приступ довољном броју типичних ГСК узорака (од 10.000 до 1.500.000 по 1 приматеља).

Трансплантација матичних хемопоетских ћелија не елиминише компликације које прате трансплантацију коштане сржи. Анализа показује да се у трансплантацији матичних ћелија крви пупчане врпце тешки облици акутне реакције "графт-версус-хост" развијају у 23%, хронични у 25% прималаца. Код онкогетолошких пацијената у 26% случајева се јављају понављања акутне леукемије у првој години након трансплантације ХСЦ панџне крви.

Последњих година интензивно се развијају методе трансплантације периферних хематопоетских матичних ћелија. Садржај ХСЦ у периферној крви је толико мали (постоји 1 ГСК на 100.000 крвних зрнаца), да њихова изолација без посебне припреме нема смисла. Према томе, донатору је раније дато курс стимулације лека отпуштања хематопоетских ћелија коштане сржи у крв. У том циљу користе се тако безопасни лекови као циклофосфамид и гранулоцитни фактор стимулације колонија. Али и након процедуре за мобилизацију ХСЦ у периферној крви, садржај ЦД34 + ћелија у њему не прелази 1,6%.

За мобилизацију ХСЦ-а у клиници, Ц-ЦЕЦ се чешће користи, а карактерише је релативно добра толерантност, изузев скоро регуларног изгледа бола у костима. Треба напоменути да употреба савремених сепаратора крви нам омогућава ефикасну изолацију стенских прогенитора хематопоезе. Међутим, под условима нормалног хематопоезе да добију довољне количине хематопоетских матичних ћелија, упоредиву продуктивних репопулиативнои сіл медуларна муљ, потребно је да наступе на најмање шест третмана. Са сваком таквом процедуром, сепаратор обрађује 10-12 литара крви, што може изазвати тромбоцитопенију и леукопенију. Поступак раздвајања подразумева администрацију антикоагулантног (натријум-цитрата) донатору, који, међутим, не искључује контактну активацију тромбоцита током екстракорпорног центрифугирања. Ови фактори стварају услове за развој заразних и хеморагичних компликација. Још један недостатак методе лежи у значајној варијабилности у одговору на мобилизацију, што захтијева праћење садржаја ХСЦ у донаторима периферне крви, неопходних за одређивање њиховог максималног нивоа.

Аутологна трансплантација ХСЦ, за разлику од алогена, потпуно искључује развој реакције одбацивања. Међутим, значајан недостатак аутологне трансплантације матичних ћелија хематопоетских, ограничавајући скуп индикација за свог понашања је велика вероватноћа реинфузиона ћелија леукемије клон са трансплантацијом. Поред тога, недостатак имуно посредованог ефекта "графт-версус-тумор" значајно повећава учесталост рецидива малигних болести крви. Стога, једини начин радикалног елиминације клонској хематопоезе неопластичних и враћање нормалне поликлонално хематопоезе у мијелодиспластичких синдрома је интензивна хемотерапија са алогенично ХСЦ трансплантације.

Али чак иу овом случају, лечење већине хемобластозе има за циљ само повећање времена преживљавања пацијената и побољшање њиховог квалитета живота. Према неколико великих студија, продужено преживљавање без болести након алотрансплантације ХСЦ постигнуто је у 40% онкогетолошких пацијената. Када се користе матичне ћелије ХбА-компатибилног брата, најбољи резултати се примећују код младих пацијената са кратком историјом болести, бројем експлозивних ћелија до 10% и повољном цитогенетиком. Нажалост, смртност повезана са процедуром за алотрансплантацију ХСЦ код пацијената са миелодиспластичним болестима остаје велика (у већини извјештаја - око 40%). Резултати 10 година рада Национални програм донација коштане сржи (510 пацијената, средња старост - 38 година) показују да преживљавање без болести је 29% у року од две године на релативно ниском вероватноћом од рецидива (14%). Међутим, морталитет проузрокован процедуром алотрансплантације ГСЦ од неповреденог донатора је изузетно висок и достигне 54% током двогодишњег периода. Слични резултати су добијени у европској студији (118 пацијената, медијана старост 24 године, преживљавање без релапса без употребе 28%, понављање 35%, смртност 58%).

Код интензивних курсева хемотерапије са накнадним обнављањем хематопоезе од стране алогених хемопоетских ћелија често настају имунохематолошке и трансфузијске компликације. На много начина, оне се односе на чињеницу да су крвне групе код људи наслеђене независно од молекула МХЦ. Због тога, чак и ако су донатори и примаоци компатибилни са главним ХЛА антигеном, њихови еритроцити могу имати другачији фенотип. Алоцирати "ларге" неспојивости када преекист у антителу примаоца за антигене донаторских црвених крвних зрнаца, а "мали" кад су донори антитела антигена црвених крвних ћелија примаоца. Постоје случајеви комбинације "велике" и "мале" некомпатибилности.

Резултати компаративне анализе клиничке ефикасности коштане сржи и хематопоетских матичних ћелија пупчане крви алографте у хематолошких малигнитета показују да деца алотрансплантацију ГСК врпце значајно смањује ризик од реакције "графт версус хост", али постоји дужи период опоравка неутрофила и тромбоцитима већа учесталост морталитета након трансплантације од 100 дана.

Истраживање узрока ране смртности омогућило је разјашњавање контраиндикација на алогене трансплантације ГСК, међу којима су најважнији:

• присуство у примаоцу или донатор позитивних тестова за инфекцију цитомегаловирусом (без спровођења превентивног третмана);
• акутна зрачења;
• присуство или чак сумња на присуство миокотске инфекције код пацијента (без системске ране профилаксе са фунгицидним лековима);
• хемобластозе, у којима су пацијенти добили продужени третман са цитостатиком (због велике вјероватноће изненадног срчане акције и вишеструких органа);
• трансплантација из ХЛА-не идентичних донора (без превенције акутне реакције трансплантације против домаћина од циклоспорина А);
• хронични вирусни хепатитис Ц (због високог ризика од развоја вено-оклузивне болести јетре).

Тако, ХСЦС трансплантација може да изазове озбиљне компликације које често доводе до смрти. Раних (до 100 дана после трансплантације) период они укључују инфективне компликације, акутна реакција "графт домаћина", одбацивање транспланта (непризхивление ХСЦ донор), веноокклиузионнаиа обољење јетре, као и због токсичности уређај режима, оштећења ткива, за које висока карактеристика стопа преуређења (коже, васкуларни ендотел, интестинални епител). Компликације касног периода после трансплантације укључују хронични реакцију "графта против домаћина" понављања основне болести, застоја у расту код деце, смањеном репродуктивне функције и обољења штитне ока.

У последње време, у вези са појавом публикација о пластичности ћелија коштане сржи, појавила се идеја коришћења ГСК за лечење срчаног удара и других болести. Иако неки експерименти на животињама такође подржавају ову могућност, потребно је потврдити закључке о пластичности ћелија костне сржи. Ове околности треба узети у обзир од стране оних истраживача који верују да се трансплантиране ћелије људске коштане сржи лако трансформишу у ћелије скелетних мишића, миокарда или ЦНС-а. Хипотеза да су ГСКс природни целични извор регенерације ових органа захтева озбиљан доказ.

Нарочито, објавио прве резултате отвореног рандомизованој студији Беленкова В. (2003), чији је циљ - да проучи ефекат Ц-СИС (тј мобилизација аутологне крви ХСЦС) на клиничке, хемодинамски и неурохуморалним стање пацијената са умереном до тешком хроничне срчане инсуфицијенције, као и његову процену сигурности са стандардном терапијом (АЦЕ инхибитори, бета-блокаторима, диуретици, срчани гликозиди). Прва публикација о резултатима аутора истраживачког програма је напоменути да је једини аргумент у прилог О-КБП су резултати лечења једног пацијента који је у току терапије са овим леком фоунд неоспорно напредак у свим клиничким и хемодинамских параметара. Међутим, теорија ХСЦС мобилизације у крвоток праћено регенерације миокарда у после инфаркта зони није потврђена - чак и код пацијената са позитивним клиничким динамика стрес ехокардиографија са добутамин није открио појаву вијабилног миокарда у ожиљак областима поља.

Треба напоменути да, до сада, подаци који омогућавају препоручивање супститутивне ћелијске терапије за широко уношење у свакодневну клиничку праксу очигледно нису довољни. Добро осмишљена и квалитетан учинак клиничких студија ради утврђивања ефикасности различитих опција терапије регенеративну ћелија, развој индикација и контраиндикација за њега, као смернице о комбиновану примену регенеративних и пластике терапије и конвенционалне хируршке или конзервативном терапијом. До сада, нема одговора на питање коју врсту популације ћелија коштане сржи (хематопоезе матичних или стромалних) може довести до неурона и кардиомиоцитима, и није јасно шта проблеми доприносе овоме ин виво.

Рад у овим областима се одвија у многим земљама. У сажетку симпозијума о акутног инсуфицијенције јетре амерички Национални институти за здравље међу обећавајућим методе лечења, заједно са трансплантацијом јетре, трансплантација означен ксенонски или алогене хепатоцита и ин витро биореактори везу са ћелијама јетре. Постоје непосредни докази да само страни, функционално активни хепатоцити могу пружити ефикасну подршку за јетру примаоца. За клиничку употребу изолованих хепатоцита, неопходно је створити ћелијску банку, која ће значајно смањити вријеме између ослобађања ћелија и њихове употребе. Најприхватљивији за стварање банке изолованих хепатоцита је криопрезервација ћелија јетре у течном азоту. При коришћењу таквих ћелија у клиници код пацијената са акутном и хроничном инсуфицијенцијом јетре откривен је прилично висок терапеутски ефекат.

Упркос оптимистичним и охрабрујуће резултате трансплантације ћелија јетре у експерименту и клинике, и даље постоје многи проблеми су и даље далеко од решења. Ово укључује ограничену количину одговарајућих органа да добију изолованим хепатоцитима недовољно ефикасне методе раздвајања, недостатак стандардизованих метода очувања ћелија јетре фази разумевање механизама регулације раста и пролиферације трансплантираних ћелија, недостатак адекватног вредновања метода прихватања калема или одбацивање алогеној хепатоцита. Ово такође треба да садржи присуство трансплантације имунитета употребом алогених или ксеногене ћелија, иако мање него у ортотопском трансплантацију јетре, али захтевају примену имуносупресивних агенаса, капсулирање изолованих хепатоцита или специјалне ензиме за обраду. Трансплантација хепатоцита често доводи до имуног сукоба између примаоца и донатора у одбацивање реакцији, која захтева употребу цитостатика. Једно од решења овог проблема је коришћење полимерних микропорозних медије да изолује ћелије јетре, који ће побољшати њихов опстанак, јер мембрана капсула ефикасно штити хепатоците, упркос имунизацијом домаћина.

Међутим, код акутне инсуфицијенције јетре таквом хепатоцита трансплантације нема ефекта због прилично дуго времена потребног за прихватања калема ћелија јетре у новом окружењу са излазом на оптимално функционисање корака. Потенцијални ограничење је секреција жучи ванматеричне трансплантације изолованих хепатоцита, а када користите биореакторе битно физиолошка препрека понаша према врсти неусклађености између хуманих протеина и протеина које производе ксеногене хепатоцита.

У литератури постоје извештаји да локална трансплантација коштане сржи строме матичних ћелија омогућава ефикасно корекција коштаних дефеката, и обнова кости у овом случају интензивнији него у спонтаног репаративног регенерације. У неколико преклиничким студијама код животињских модела су убедљиво могућност коришћења трансплантација коштане сржи стромалних ћелија у ортопедији, али да оптимизује ове методе, чак иу најједноставнијим случајевима, потребно је додатно радити. Конкретно, оптимални услови за експанзију остеогених стромалних ћелија ек виво још нису пронађени, структура и састав њиховог идеалног носача (матрице) остају необрађени. Није одређен минималан број ћелија потребних за регенерацију космичког костију.

Показало да мезенхималне матичне ћелије испољавају трансгермалнуиу пластичност - способност да диференцирају у типовима ћелија које фенотипски невезаних оригиналном ћелијској линији. Под оптималним условима полицлонал матичних ћелијска линија култура костне сржи стромалних ћелија одржаване ин витро више од 50 подела, који омогућава да прими милијарде стромалних ћелија у 1 мл коштане сржи аспирата. Међутим, популација месенхималне матичних ћелија карактерише хетерогеност која се манифестује као варијабилности величинама колонија, различитим брзинама формирања и морфолошког разноликости типова ћелија - од фибробласта налик вретенасту великих равних ћелија. У року од 3 недеље култивисања стромалних матичних ћелија посматране фенотипске хетерогеност: једна колонија формирају нодуле коштаног ткива, док други - кластери адипоцита, и друге, ретке, формирајући острва хрскавице.

За лечење дегенеративних болести централног нервног система, прво је коришћена трансплантација ембрионалног нервног ткива. У последњих неколико година, уместо фетуса мождано ткиво трансплантата челичних ћелијских елемената неуроспхерес изведени из неуралне матичних ћелија (.Полтавтсева, 2001). Неуроспере садрже почињене неуронске прекурсоре и неуроглију - то даје наду за рестаурацију изгубљених можданих функција након трансплантације. Након трансплантације ћелија неуроспхерес диспергован пацова стриаталне Мозак тела обележеног њихову пролиферацију и диференцијацију у допаминергичних неурона, који елиминише мотора асиметрију код пацова са експерименталним гемипаркинсонизмом. Међутим, у неким случајевима, туморске ћелије су се развиле из ћелија неуросфере, што је довело до смрти животиња (Бјорклунд, 2002).

Клиника пажљиво проучавање две групе пацијената код којих знао да их (доубле-блинд) ни пацијенти ни лекари гледају, да је једна група пацијената пресађено рани ткиво са неурона које производе допамин, друга група пацијената је направио погрешан корак, дала неочекиване резултате . Пацијенти који су трансплантирани ембрионским нервним ткивом нису били бољи од пацијената контролне групе. Осим тога, 5 од 33 пацијената након 2 године након трансплантације ембрионалног нервно ткиво развијене упорно дискинезија, који није имао никакву контролу пацијената групу (Матичне ћелије: научни напредак и будуће истраживачке правце Нац Инст, здравства САД ...). Један од нерешених проблема клиничким испитивањима можданих нервних стем ћелија је анализа правих перспективе и ограничења њихових деривата трансплантације за корекцију поремећаја ЦНС. Могуће је да продужено заплена активност индукован неироногенез у хипокампусу, што доводи до њених структурних и функционалних промена може бити фактор у прогресивном развоју епилепсије. Овај закључак је посебно значајна, јер указује на могуће негативне ефекте на стварање нових неурона у мозгу одраслих, као и формирање аберантних синаптичких веза.

Не треба заборавити да у култивације медијима са цитокинима (митогена) апроксимира карактеристике матичних ћелија оној ћелија тумора, јер се јављају близу промене у регулацији циклуса ћелија, одређивањем способности бесконачно деле. Глупо је трансплантирати на људе раним дериватима ембрионалних матичних ћелија, јер је у овом случају опасност од развоја малигних неоплазми веома велика. Много је сигурније користити своје посвећено потомство, односно прогениторске ћелије диференцираних линија. Међутим, у овом тренутку још увијек није развијена поуздана техника за добијање стабилних хуманих ћелијских линија које се разликују у правом смеру.

Коришћење технологија молекуларне биологије за корекцију насљедне патологије и људских болести уз помоћ модификације матичних ћелија је од великог интересовања за практичну медицину. Карактеристике генома матичних ћелија омогућавају развој јединствених шема трансплантације са циљем исправљања генетских болести. Али у овом правцу постоје и многа ограничења која треба превазићи пре почетка практичне примене генетичког инжењеринга матичних ћелија. Пре свега, неопходно је оптимизирати процес модификације геномова матичних ћелија ек виво. Познато је да пролонгирана пролиферација матичних ћелија (3-4 недеље) смањује њихову трансфекцију, па је потребно неколико циклуса трансфекције да би се постигао висок степен њихове генетске модификације. Међутим, главни проблем се односи на трајање експресије терапијског гена. До сада, у једној од студија, период ефективне експресије после трансплантације модификованих ћелија није био већи од четири месеца. У 100% случајева временом, експресија трансфектованих гена је смањена због инактивације промотера и / или смрти ћелија са модификованим геномом.

Важан проблем је трошак коришћења ћелијских технологија у медицини. На пример, процењени годишњи захтев за финансирање само медицинских трошкова одељења за трансплантацију коштане сржи, који је намењен за обављање 50 трансплантата годишње, износи око 900.000 долара.

Развој ћелијских технологија у клиничкој медицини је комплексан и вишестепени процес који укључује конструктивну сарадњу мултидисциплинарних научних и клиничких центара и међународне заједнице. Истовремено, посебна пажња посвећена је научној организацији истраживања у области ћелијске терапије. Најважнији од њих су развој протокола за клиничка испитивања, праћење валидности клиничких података, формирање националног истраживачког регистра, интеграција у међународне програме мултицентричних клиничких испитивања и увођење резултата у клиничку праксу.

Закључујући увод у проблеме трансплантације ћелија, желео бих да изразим наду да ће заједничким напорима водећих стручњака у Украјини из различитих области науке осигура значајан напредак у експерименталним и клиничким студијама и да ће омогућити у наредним годинама за изналажење ефикасних начина да се помогне озбиљно болесних особа којима је потребна трансплантација органа , ткива и ћелије.

[24], [25], [26], [27], [28], [29]