Хематопоетске матичне ћелије из крви пупчане врпце

Крв из пупчане врпце је добар извор хематопоетских матичних ћелија у смислу пролиферативног потенцијала и могућности репопулације хематопоетских ћелија. Више пута је показано да до рођења крв из пупчане врпце садржи довољно велики број слабо асоцираних хематопоетских ћелија прекурсора. Неки аутори сматрају да је предност трансплантације хематопоетских матичних ћелија из крви из пупчане врпце одсуство потребе за тражењем донора компатибилног са HLA антигенима. По њиховом мишљењу, незрелост имуног система новорођенчета узрокује смањену функционалну активност имунокомпетентних ћелија и, сходно томе, мању учесталост тешке болести калем-против-домаћина него код трансплантације коштане сржи. Истовремено, стопа преживљавања трансплантације ћелија из крви из пупчане врпце није нижа од стопе преживљавања ћелија коштане сржи, чак и у случају коришћења мањег броја HSC ћелија примењених на 1 кг телесне тежине пацијента. Међутим, по нашем мишљењу, питања оптималног броја трансплантираних ћелија из пупчане врпце потребних за ефикасно прихватање у телу примаоца, њихова имунолошка компатибилност и низ других аспеката проблема трансплантације хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце захтевају озбиљнију анализу.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]

Добијање хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце

Поступак добијања хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце захтева њено прикупљање одмах након рођења детета и њено одвајање од плаценте када је плацента ин утеро или екс утеро, као и током царског реза, али и екс утеро. Показано је да ако се време од тренутка рођења до одвајања новорођенчета од плаценте смањи на 30 секунди, запремина добијене крви из пупчане врпце се повећава у просеку за 25-40 мл. Ако се овај поступак изведе касније, губи се иста количина крви. Утврђено је да рано одвајање детета од плаценте не повлачи никакве негативне последице по новорођенче.

Руски истраживачки институт за хематологију и трансфузиологију развио је ефикасне и јефтине технологије за добијање крви из пупчане врпце како током нормалног порођаја ((70,2+25,8) мл), тако и царског реза ((73,4+25,1) мл). Предложена је метода за одвајање крви из пупчане врпце са довољно високим приносом нуклеарних и мононуклеарних ћелија - (83,1+9,6) и (83,4+14,1)%, респективно. Унапређена је метода за криопрезервацију крви из пупчане врпце, која обезбеђује високу очуваност мононуклеарних ћелија и CFU-GM - (96,8+5,7) и (89,6+22,6)%, респективно. Утврђена је ефикасност дренажне методе за сакупљање крви из пупчане врпце коришћењем контејнера Kompoplast-300 (Русија). Аутори су сакупљали крв из пупчане врпце одмах након рођења детета и његовог одвајања од плаценте, у условима постављања плаценте in utero или ex utero. Пре пункције пупчане вене, пупчана врпца је једном третирана 5% јодном тинктуром, а затим два пута 70% етил алкохолом. Крв је спонтано текла кроз спојне цеви у посуду. Поступак сакупљања није трајао дуже од 10 минута. Просечна запремина 66 узорака крви из пупчане врпце сакупљених дренажом била је (72+28) мл, а број леукоцита у просечној укупној запремини узорка био је (1,1+0,6) x 107. Приликом анализе крви из пупчане врпце на стерилност (бактеријска контаминација, ХИВ-1, вируси хепатитиса Б и Ц, сифилис и цитомегаловирусна инфекција), IgG антитела на вирус хепатитиса Ц су откривена само у једном узорку. У другој студији, плацента је постављена феталном површином надоле на посебан оквир одмах након рођења, пупчана врпца је третирана 5% раствором јода и 75% етил алкохолом. Пупчана вена је дренирана помоћу игле из система за трансфузију (Г16). Крв је спонтано текла у посуду. Просечна запремина крви сакупљене на овај начин била је (55+25) мл. У раду Г. Коглера и др. (1996), крв из пупчане врпце је прикупљена затвореном методом и добијене су велике количине крви - у просеку (79+26) мл. Аутори напомињу да је међу 574 узорка крви из пупчане врпце, око 7% садржало мање од 40 мл крви, што не дозвољава да се користе за трансплантацију. К. Исојама и др. (1996), прикупљајући крв из пупчане врпце активном ексфузијом помоћу шприцева, добили су просечно 69,1 мл крви (запремина крви из пупчане врпце варирала је од 15 до 135 мл). Коначно, А. Абдел-Магид ПИ и др. (1997) успели су да добију просечно 94 мл крви из пупчане врпце (од 56 до 143 мл) путем катетеризације пупчане вене.

Да би се смањио ризик од јатрогене инфекције и контаминације мајчиним секретом, развијен је затворени систем за прикупљање крви заснован на широко коришћеном систему за трансфузију компаније Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (САД), који садржи 62,5 мл CPDA (цитрат-фосфат-декстроза са аденином) као антикоагуланса. Технологија добијања материјала је од примарног значаја за припрему висококвалитетног узорка у погледу запремине, садржаја и чистоће ћелијске суспензије. Од постојећих метода за прикупљање крви из пупчане врпце, које се конвенционално класификују у затворене, полуотворене и отворене системе, предност треба дати првој, јер затворени систем значајно смањује ризик од микробне контаминације материјала, као и контаминације ћелијске суспензије мајчиним ћелијама.

А. Наглер и др. (1998) спровели су упоредну анализу ефикасности сва три система за прикупљање крви из пупчане врпце. У првој варијанти, поступак је спроведен у затвореном систему ексфолијацијом крви директно у посуду. У другој варијанти, крв из пупчане врпце је добијена активним извлачењем крви помоћу шприца МП1, након чега је уследило испирањем плацентних вена и истовременим одвођењем крви у посуду (отворена метода). У трећој варијанти, крв је сакупљена у полуотвореном систему активним извлачењем шприцевима и испирањем кроз пупчану артерију са истовременим извлачењем у посуду. У првој варијанти, аутори су добили крв из пупчане врпце у запремини од (76,4+32,1) мл са садржајем леукоцита од (10,5+3,6) x 10 ⁶ у 1 мл крви. У другој варијанти, одговарајући индикатори су били (174,4+42,8) мл и (8,8+3,4) x 10 ⁶ /мл; у трећем - (173,7+41,3) мл и (9,3+3,8) x 10 ⁶ /мл. Најчешћа инфекција узорака крви из пупчане врпце примећена је при коришћењу отвореног система. Утврђена је директна корелација између масе плаценте и запремине екстраховане крви - са повећањем масе плаценте, количина сакупљене крви се повећава.

Након сакупљања крви из пупчане врпце, следи фаза сепарације - изолација мононуклеарних ћелија и пречишћавање ћелијске суспензије од еритроцита. У експерименталним условима, нуклеарне ћелије се изолују седиментацијом метилцелулозом током лизе еритроцита амонијум хлоридом. Међутим, метилцелулоза се не сме користити у клиничке сврхе, јер губици хематопоетских матичних ћелија на њој достижу 50-90%. Лиза еритроцита се такође готово никада не врши у клиници због великих запремина радног раствора, иако је проценат изолације нуклеарних ћелија са CD34+ фенотипом, као и ћелија прогенитора са CFU-GM и CFU-GEMM функцијама на овај начин знатно већи. Пријављује се појава новог средства за изолацију мононуклеарних ћелија у градијенту густине, раствора густине бујанта (BDS72). Ова супстанца има следеће физиолошке параметре: pH - 7,4, осмолалност - 280 mOsm/kg, густина - 1,0720 g/ml. Према ауторима, може се користити за изоловање до 100% CD34-позитивних ћелија и уклањање 98% еритроцита. Међутим, BDS72 се још увек не користи у клиници.

У одобреним методама изоловања ћелија са нуклеусом из крви пупчане врпце, обично се користи 10% раствор хидроксиетил скроба или 3% раствор желатина. Ефикасност седиментације еритроцита и изолације ћелија са нуклеусом у оба случаја је приближно једнака. Међутим, када се желатин користи као средство за седиментацију, могуће је добити нешто већу количину CFU-GM него када се користи хидроксиетил скроб. Претпоставља се да су разлике у ефикасности изолације CFU-GM последица различитих брзина седиментације појединачних фракција ћелија са нуклеусом или способности молекула хидроксиетил скроба да се апсорбују на површини рецептора хематопоетских ћелија и тиме блокирају њихову осетљивост на факторе који стимулишу колоније који се користе у култивацији CFU-GM in vitro. Ипак, оба седиментатора могу бити погодна за изоловање ћелија са нуклеусом приликом стварања великих банака крви из пупчане врпце.

Методе одвајања и криопрезервације крви из пупчане врпце у основи се не разликују од оних које се користе у раду са хематопоетским матичним ћелијама периферне крви и коштане сржи одраслих донора. Али приликом припреме великог броја узорака крви из пупчане врпце за њене банке, методе одвајања морају, пре свега, бити јефтине. Стога се, нажалост, тренутно, за клиничке потребе користе већ тестиране рутинске методе изоловања и криопрезервације ћелија крви из пупчане врпце, а ефикасније, али скупље методе остају удела експериментатора.

Генерално, одобрени су критеријуми за процену броја хематопоетских ћелија и захтеви за испитивање узорака крви из пупчане врпце ради идентификације инфективних агенаса. Да би се осигурала безбедност трансплантације хематопоетских ћелија из крви из пупчане врпце, сви узорци крви морају се првенствено испитати на хематогено пренете инфекције и генетске болести. Више аутора препоручује додатне посебне методе за испитивање крви из пупчане врпце ради дијагностиковања генетских болести као што су а-таласемија, анемија српастих ћелија, недостатак аденозин деаминазе, Брутонова агамаглобулинемија, Хурлерова и Понтерова болест.

Према препорукама Л. Тихелија и коаутора (1998), сваки узорак крви из пупчане врпце мора се тестирати на нуклеарне ћелије, CD34-позитивне ћелије и CFU-GM, мора се извршити HLA типизација и одредити крвна група према ABO и њеном Rh фактору. Поред тога, морају се извршити бактериолошка култура, серолошко тестирање на HIV и цитомегаловирусну инфекцију, HBsAg, вирусни хепатитис C, HTLY-I и HTLV-II (хумана Т-ћелијска леукемија), сифилис и токсоплазмозу. Полимеразна ланчана реакција за цитомегаловирус и HIV инфекцију је обавезна.

Поступак за добијање крви из пупчане врпце мора се спроводити у строгом складу са принципима медицинске биоетике. Пре узимања крви, неопходно је добити сагласност труднице за његово спровођење. Прелиминарни разговор са трудницом ради добијања информисаног пристанка за све манипулације, од ексудата крви до попуњавања документације, спроводе само медицински радници. Ни у ком случају није дозвољено да било коју од ових процедура спроводе особља са биолошким, хемијским, фармацеутским или другим немедицинским образовањем, због кршења утврђених норми биоетике и људских права. У случају позитивних тестова на носилаштво HBsAg, присуство антитела на узрочнике хепатитиса Ц, ХИВ инфекције и сифилиса, крв из пупчане врпце се не сакупља, а узорци већ прикупљене крви се одбацују и уништавају. Треба напоменути да је носилаштво латентних инфекција код новорођенчади много ређе него код одраслих, стога је вероватноћа хематогеног преноса и развоја инфективних компликација током инфузија хематопоетских ћелија из крви из пупчане врпце знатно мања него у случају коришћења коштане сржи одраслог донора за трансплантацију.

Важан аспект клиничке употребе крви из пупчане врпце је евалуација трансплантације, која се заснива на одређивању количине хематопоетских матичних ћелија у узорку крви из пупчане врпце и доза ћелија потребних за трансплантацију. Тренутно, стандарди за оптималну количину ћелија из крви из пупчане врпце потребних за трансплантацију још увек нису развијени. Не постоји општеприхваћено гледиште чак ни о рутинским параметрима као што су број CD34-позитивних ћелија и CFU-GM. Неки аутори процењују потенцијал хематопоетских ћелија анализом дугорочних култура са одређивањем садржаја јединица које формирају колоније заједничких за гранулоците, еритроците, моноците и мегакариоците - CFU-GEMM.

Међутим, у клиничком окружењу, стандардна евалуација трансплантације крви из пупчане врпце обично укључује само одређивање броја нуклеарних или мононуклеарних ћелија.

Чување хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце

Такође постоје неки проблеми у технологији чувања хематопоетских ћелија крви из пупчане врпце. Приликом криопрезервације хематопоетских матичних ћелија, да би се постигао оптималан режим замрзавања, потребно је што више смањити запремину крви из пупчане врпце, а такође и унапред уклонити еритроците како би се избегла хемолиза и ризик од развоја реакције некомпатибилности за еритроцитне антигене (АБО, Rh). За ове сврхе су погодне различите методе изоловања нуклеарних ћелија. Почетком 90-их година прошлог века, најшире коришћена метода била је изоловање нуклеарних ћелија у градијенту густине на бази Фикола густине 1,077 г/мл или Перкола густине 1,080 г/мл. Раздвајање крви из пупчане врпце у градијенту густине омогућава изолацију претежно мононуклеарних ћелија, али доводи до значајних губитака хематопоетских ћелија прогенитора - до 30-50%.

Ефикасност седиментације хидроксиетил скроба у процесу изоловања хематопоетских ћелија из пупчане врпце различито се процењује. Неки аутори указују на низак квалитет сепарације применом ове методе, док други истраживачи, напротив, међу свим могућим методама, дају предност изоловању ХСК из пупчане врпце применом 6% раствора хидроксиетил скроба. Истовремено, истиче се висока ефикасност седиментације хематопоетских ћелија, која, према неким подацима, достиже од 84% до 90%.

Заговорници другачијег гледишта сматрају да су практично све методе фракционисања повезане са великим губицима нуклеарних ћелија и предлажу да се сепарација изврши центрифугирањем, делећи крв из пупчане врпце на 3 фракције: еритроците, леукоцитни прстен и плазму. Изоловањем ћелија на овај начин, аутори су открили да је садржај мононуклеарних ћелија, раних хематопоетских ћелија прогенитора и ћелија са CD34+ имунофенотипом на крају износио 90, 88 и 100% почетног нивоа, респективно. Сличне вредности за повећање ћелија крви из пупчане врпце пречишћених овом методом добили су и други истраживачи: након седиментације, изоловано је 92% нуклеарних ћелија, 98% мононуклеарних ћелија, 96% CD34-позитивних ћелија и 106% јединица које формирају колоније.

Крајем 1990-их, желатин је био широко коришћен као средство за седиментацију. У клиничкој пракси, желатин се користи за изолацију хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце од 1994. године. Приликом коришћења 3% раствора желатина, ефикасност изоловања ћелија са нуклеусом достиже 88-94%. Масовна употреба желатина у стварању банке крви из пупчане врпце потврдила је његове предности у односу на друга средства за седиментацију. Упоредна анализа ефикасности свих горе наведених метода за изоловање ћелија са нуклеусом под условима њихове секвенцијалне употребе на сваком од тестираних узорака крви из пупчане врпце доказала је да је 3% раствор желатина оптимално средство за седиментацију у погледу приноса мононуклеарних ћелија са CD34+/CD45+ фенотипом, као и у погледу броја CFU-GM и CFU-GEMM. Методе које користе градијент густине Фикола, као и употреба хидроксиетил скроба и метилцелулозе, биле су знатно мање ефикасне, са губицима хематопоетских ћелија који су достигли 60%.

Ширење обима трансплантације матичних ћелија из пупчане врпце повезано је не само са развојем метода за њихово прикупљање, већ и са складиштењем. Постоји много проблема који су директно повезани са припремом крви из пупчане врпце за дугорочно складиштење и избором оптималне технологије за криопрезервацију њених узорака. Међу њима су питања изводљивости извођења поступака сепарације, коришћења различитих медијума за криопрезервацију и примене метода за припрему одмрзнутих ћелија за трансплантацију. Транспорт узорака нативне крви из пупчане врпце често се врши из региона удаљених од хематолошких центара. У том смислу, јавља се проблем прихватљивих периода складиштења крви из пупчане врпце од тренутка њеног прикупљања до почетка криопрезервације, што је од посебног значаја приликом стварања банака крви из пупчане врпце.

Студија функционалне активности хематопоетских ћелија у крви из пупчане врпце након дуготрајног складиштења (до 12 година) у течном азоту показала је да око 95% хематопоетских ћелија не губи свој високи пролиферативни капацитет током овог периода. У раду С. Јурасова и коаутора (1997) доказано је да складиштење крви из пупчане врпце на собној температури (22°C) или на 4°C током 24 и 48 сати не смањује значајно виталност хематопоетских ћелија, која износи 92 и 88% од почетног нивоа, респективно. Међутим, ако се период складиштења продужи на три дана, број виталних ћелија са нуклеусом у крви из пупчане врпце значајно се смањује. Истовремено, друге студије су показале да када се складиште 2-3 дана на 22 или 4°C, пре свега пати виталност зрелих гранулоцита, а не хематопоетских ћелија.

Виталност хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце може бити негативно погођена компонентама система за прикупљање крви из пупчане врпце. Анализа ефекта различитих антикоагуланса чији је механизам деловања последица везивања јона калцијума (ACD, EDTA, XAPD-1) на хематопоетске прогениторске ћелије у условима складиштења крви из пупчане врпце од 24 до 72 сата открила је њихов негативан ефекат на виталност ћелија са нуклеацијом. У том смислу, аутори препоручују употребу PBS (фосфатног пуферског раствора) са додатком нативног хепарина без конзерванса у концентрацији од 20 U/ml, што, по њиховом мишљењу, омогућава повећање периода складиштења нефракционисане крви из пупчане врпце на 72 сата и очување функционалне активности јединица које формирају колоније. Међутим, студија безбедности CFU-GM и CFU-G показала је да време складиштења крви из пупчане врпце пре криопрезервације не би требало да пређе девет сати. Очигледно је да принцип који треба применити у овом случају јесте да у присуству супротстављених података треба користити минимални препоручени период складиштења крви из пупчане врпце и да се што пре започне програмирано замрзавање изолованих ћелија.

Приликом замрзавања хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце, обично се користи 10% раствор ДМСО као криопротектант. Међутим, поред израженог криопротективног ефекта, диметил сулфоксид у таквој концентрацији има и директан цитотоксични ефекат, чак и уз минимално излагање хематопоетским ћелијама из пупчане врпце. Да би се смањио цитотоксични ефекат ДМСО, користи се нулта температура излагања, повећава се брзина свих манипулација и врши се вишеструко испирање након одмрзавања узорака крви из пупчане врпце.

Од 1995. године, Институт за хематологију и трансфузиологију Академије медицинских наука Украјине развија научни правац усмерен ка свеобухватном проучавању крви из пупчане врпце као алтернативног извора хематопоетских матичних ћелија. Посебно су развијене нове технологије за криопрезервацију хематопоетских ћелија нефракционисане и фракционисане крви из пупчане врпце на ниским температурама. Као криопротектант користи се нискомолекуларни медицински поливинилпиролидон. Метод криопрезервације нефракционисане крви из пупчане врпце заснива се на оригиналној технологији за претходну припрему ћелија за замрзавање и методи за посебну обраду ћелијске суспензије непосредно пре трансплантације.

Један од најважнијих фактора који утичу на ниво функционалне активности криопрезервираних хематопоетских матичних ћелија је брзина хлађења ћелијске суспензије, посебно током фазе кристализације. Софтверски приступ решавању проблема брзине и времена замрзавања пружа велике могућности за стварање једноставних и веома ефикасних метода криопрезервације, без испирања ћелијске суспензије од криопротектора пре трансплантације.

Најопасније фазе за одрживост ћелија током њихове припреме су фазе директног замрзавања и одмрзавања. Приликом замрзавања хематопоетских ћелија, значајан део њих може бити уништен у тренутку преласка међућелијске средине из течне у чврсту фазу - кристализације. Да би се смањио проценат ћелијске смрти, користе се криопротектори, чији су механизми деловања и криопротективна ефикасност довољно обрађени у научној литератури.

Обећавајући правац за оптимизацију метода криопрезервације ћелија коштане сржи и крви пупчане врпце је комбинација ниских концентрација неколико криопротектора са различитим механизмима деловања у једном раствору, на пример, ДМСО који делује на интрацелуларном нивоу и хидроксиетил скроба или албумина, који имају екстрацелуларни заштитни ефекат.

За криопрезервацију ћелија крви из пупчане врпце традиционално се користи 20% раствор ДМСО, који се полако сипа у ћелијску суспензију уз константно механичко мешање у леденом купатилу док се не постигне једнак (1:1) однос запремина криопротектанта и ћелијске суспензије. Коначна концентрација диметил сулфоксида је 10%. Ћелијска суспензија се затим хлади у програмираној криогеној јединици брзином од GS/min до -40°C, након чега се брзина хлађења повећава на 10°C/min. Након достизања -100°C, посуда са ћелијском суспензијом се ставља у течни азот (-196°C). Овом техником криопрезервације, очување функционално активних мононуклеарних ћелија након одмрзавања достиже 85% од првобитног нивоа.

Модификације метода криопрезервације имају за циљ смањење концентрације ДМСО додавањем хидроксиетил скроба (коначне концентрације диметил сулфоксида и хидроксиетил скроба су 5 и 6%, респективно). Висока ефикасност такве комбинације криопротектора примећена је при замрзавању суспензије мијелоидних ћелија, и то са не мањом цитопротекцијом него када се користи само 10% раствор диметил сулфоксида. Број одрживих ћелија са нуклеусом достигао је 96,7% почетног нивоа, а њихова функционална активност, процењена бројем CFU-GM, била је 81,8%.

Приликом коришћења раствора диметил сулфоксида у концентрацијама од 5 до 10% у комбинацији са 4% хидроксиетил скроба (коначна концентрација), утврђено је да безбедност CD34-позитивних ћелија у таквим опсезима диметил сулфоксида остаје практично непромењена. Истовремено, када се концентрација диметил сулфоксида смањи са 5 на 2,5%, примећује се масовна смрт ћелија крви пупчане врпце - број одрживих ћелијских јединица смањује се са 85,4 на 12,2%. И други аутори су дошли до закључка да управо 5 и 10% раствори диметил сулфоксида (у ауторовој верзији - у комбинацији са аутологним серумом) пружају цитопротекцију са максималном ефикасношћу током криопрезервације ХСК крви пупчане врпце. Поред тога, висока очуваност сукцесивно замрзнутих и одмрзнутих ћелија је примећена у случају комбинације 5 или 10% диметил сулфоксида са 4% раствором хидроксиетил скроба, посебно при контролисаној брзини хлађења од GS/мин. У другој студији коришћен је криопротективни раствор који се састоји од три састојка - ДМСО, пречишћеног хуманог албумина и РПМИ медијума у односу 1:4:5, који је додат у ћелијску суспензију до једнаког запреминског односа (коначна концентрација диметил сулфоксида била је 5%). Након одмрзавања у воденом купатилу на температури од +4 ГС, очуваност CFU-GM је премашила 94%.

Неки аутори предлажу употребу нефракционисане крви из пупчане врпце за криопрезервацију, пошто се значајне количине хематопоетских ћелија губе током процеса уклањања црвених крвних зрнаца. У овој варијанти, користи се 10% раствор диметил сулфоксида за заштиту мононуклеарних ћелија од штетних ефеката криокристализације. Замрзавање се врши константном брзином хлађења од GS/мин до -80°C, након чега се суспензија ћелија из крви из пупчане врпце спушта у течни азот. Овај метод замрзавања резултира делимичном лизом црвених крвних зрнаца, тако да узорци крви не захтевају фракционисање. Након одмрзавања, суспензија ћелија се испира од слободног хемоглобина и диметил сулфоксида у раствору људског албумина или у аутологном крвном серуму пацијента и користи се за трансплантацију.

Очуваност хематопоетских ћелија прогенитора након одмрзавања нефракционисане крви из пупчане врпце је заиста већа него код фракционисане крви из пупчане врпце, међутим, због криостабилности неких еритроцита, могу настати озбиљни проблеми након трансфузије услед трансфузије АБО-некомпатибилних еритроцита. Поред тога, запремина ускладиштене нефракционисане крви значајно се повећава. Са клиничке тачке гледишта, криопрезервација хематопоетских ћелија из крви из пупчане врпце, претходно изолованих и пречишћених од других ћелијских фракција, је и даље пожељнија.

Посебно је развијен метод за криопрезервацију фракционисаних ћелија крви из пупчане врпце, који омогућава уклањање еритроцита у фази припреме за замрзавање, у којем се 6% раствор хидроксиетил скроба користи као део раствора за замену плазме „Стабизол“. Након одмрзавања, ћелијска суспензија добијена на овај начин је спремна за клиничку употребу без додатних манипулација.

Дакле, тренутно постоји много прилично ефикасних метода криопрезервације крви из пупчане врпце. Њихова фундаментална разлика је у томе што се узорци крви замрзавају нефракционисани или се подвргавају раздвајању на ћелијске фракције у фази припреме, а припремају се ћелије са нуклеусом без примесе еритроцита.

Трансплантација хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце

Крајем осамдесетих и почетком деведесетих година прошлог века утврђено је да крв из пупчане врпце, која пружа фетусу животну подршку током трудноће, има висок садржај хематопоетских матичних ћелија. Релативна једноставност добијања ћелија крви из пупчане врпце и одсуство очигледних етичких проблема допринели су употреби матичних ћелија крви из пупчане врпце у практичној медицини. Прва успешна трансплантација крви из пупчане врпце детету са Фанконијевом анемијом послужила је као полазна тачка за проширење обима трансплантације матичних ћелија из крви из пупчане врпце и стварање система за њено складиштење. У светском систему банака крви из пупчане врпце, највећи је Њујоршки центар за плацентну крв, који се налази на билансу стања Националног института за здравље САД. Број ускладиштених узорака крви из пупчане врпце у овој банци приближава се броју од 20.000. Број прималаца (углавном деце) који су прошли успешну трансплантацију такође расте. Према подацима Министарства здравља САД, период живота без рецидива код прималаца трансплантиране крви из пупчане врпце након трансплантације већ прелази 10 година.

То није изненађујуће, будући да су бројне студије хематопоетског потенцијала крви из пупчане врпце показале да по количини и квалитету најранијих матичних ћелија она не само да није инфериорна у односу на коштану срж одрасле особе, већ је у неким аспектима и превазилази. Већи пролиферативни потенцијал матичних ћелија из крви из пупчане врпце последица је онтогенетских карактеристика ћелијске сигнализације, присуства рецептора за специфичне факторе раста на ХСК, способности ћелија из крви из пупчане врпце за аутокрину производњу фактора раста и велике величине и дужине теломера.

Дакле, геномске и фенотипске карактеристике хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце предодређују висококвалитетно прихватање трансплантата са високим потенцијалом за обнављање донорске хематопоезе у телу примаоца.

Предности хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце

Међу стварним предностима коришћења хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце за трансплантацију у односу на друге изворе хематопоетских ћелија, вреди истаћи практично нулти ризик по здравље донора (ако не узмемо у обзир плаценту као такву) и одсуство потребе за општом анестезијом. Употреба пупчане врпце проширује могућности трансплантације ћелија због делимично ХЛА-компатибилних трансплантата (некомпатибилност од једног до три антигена). Развијен је метод за дугорочно складиштење хематопоетских ћелија из пупчане врпце у замрзнутом стању, што повећава вероватноћу добијања ретких ХЛА типова и смањује време тражења ХЛА-компатибилног трансплантата за алогену трансплантацију. Истовремено, значајно се смањује ризик од развоја одређених латентних инфекција које се преносе трансмисивним путем. Поред тога, настаје јефтин облик биолошког животног осигурања због могућности коришћења ћелија пупчане врпце за аутологну трансплантацију.

Међутим, због малих запремина крви које се могу сакупити из плаценте (у просеку не више од 100 мл), проблем добијања максимално могуће количине крви из пупчане врпце долази до изражаја уз строго поштовање услова минималног ризика од бактеријске контаминације добијених узорака крви из пупчане врпце.

Примитивне хематопоетске ћелије из крви пупчане врпце се обично идентификују по присуству CD34 гликофосфопротеина на њиховој површини, као и на основу њихових функционалних својстава проучавањем клоногености или формирања колонија in vitro. Упоредна анализа је показала да је у крви пупчане врпце и коштаној сржи максималан садржај CD34-позитивних ћелија у мононуклеарној фракцији 1,6 и 5,0%, респективно, максимални ниво јединица које формирају колоније у субпопулацији CD34+ ћелија је 80 и 25%, укупна ефикасност клонирања CD34+ ћелија је 88 и 58%, максимални садржај ћелија које формирају колоније са високим пролиферативним потенцијалом (HPP-CFC у CD34+ популацији) је 50 и 6,5%. Треба додати да су ефикасност клонирања CD34+CD38 ћелија и способност реаговања на стимулацију цитокинима такође веће код хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце.

Комбинација фенотипских антигена Thy-1, CD34 и CD45RA потврђује висок пролиферативни потенцијал хематопоетских ћелија из крви пупчане врпце, а експресија ова три антигена на површини ћелија крви пупчане врпце указује на њихову припадност матичним ћелијама. Поред тога, утврђено је да крв из пупчане врпце садржи ћелије са фенотипом CD34+ које немају маркере линеарне диференцијације. Ниво ћелијских субпопулација са фенотипским профилом CD34+/Lin у крви из пупчане врпце је око 1% од укупног броја CD34-позитивних ћелија. Хематопоетске прогениторске ћелије из крви из пупчане врпце дају почетак и лимфоидној ћелијској линији и плурипотентној мијелоидној серији линеарне ћелијске диференцијације, што такође указује на њихову припадност матичним ћелијама.

Као што је већ поменуто, значајне разлике између коштане сржи и крви из пупчане врпце су у количини хематопоетских ћелија које се користе за трансплантацију добијених током једног поступка прикупљања. Ако је током трансплантације коштане сржи губитак ћелијске масе током сепарације, криопрезервације, одмрзавања и тестирања прихватљив у оквиру 40-50%, онда су за крв из пупчане врпце такви губици ћелија веома значајни, јер ако се користи недовољна количина ХСК, трансплантација може бити неефикасна. Према Г. Коглеру и др. (1998), за трансплантацију ћелија са телесном тежином примаоца од 10 кг, сви узорци крви из пупчане врпце могу бити потенцијални трансплантати (укупан број прикупљених узорака крви из пупчане врпце је 2098), са телесном тежином од 35 кг - 67%, а само 25% узорака може обезбедити ефикасну трансплантацију код пацијената са телесном тежином од 50-70 кг. Ова клиничка ситуација указује на потребу за оптимизацијом и побољшањем ефикасности постојећих метода прикупљања, репродукције и складиштења ћелија крви из пупчане врпце. Стога се у литератури тренутно широко разматрају питања стандардизације метода прикупљања, испитивања, одвајања и криопрезервације крви из пупчане врпце ради стварања банака крви, њене употребе у клиници, а такође се прописују услови и рокови складиштења хематопоетских матичних ћелија крви из пупчане врпце.

[ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Употреба хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце у медицини

^{Обично је могуће изоловати до 10⁶} хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце, ретко више. У том смислу, питање да ли је таква количина хематопоетских ћелија из крви пупчане врпце довољна за обнављање хематопоезе код одраслог примаоца остаје отворено до данас. Мишљења о овом питању су подељена. Неки истраживачи сматрају да је таква количина сасвим довољна за трансплантацију деци, али премало за трансплантацију одраслој особи, за коју је оптимална количина уношење (7-10) x 10⁶ ^CD34 -позитивних ћелија на 1 кг телесне тежине - просечно 7 x 10⁶ ^по трансплантацији. Из ових прорачуна произилази да један узорак крви пупчане врпце садржи 700 пута мање хематопоетских матичних ћелија него што је потребно за једну трансплантацију одраслом пацијенту. Међутим, таква квантитативна процена се врши по аналогији са бројем трансфузованих ћелија коштане сржи и уопште не узима у обзир онтогенетске карактеристике хематопоезе.

Посебно се игнорише чињеница већег пролиферативног потенцијала хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце у поређењу са хематопоетским ћелијама прогениторима коштане сржи. Резултати студија потенцијала формирања колонија in vitro указују на то да је једна доза крви из пупчане врпце способна да обезбеди реконституцију хематопоезе код одраслог примаоца. С друге стране, не треба заборавити да се број матичних ћелија из крви из пупчане врпце смањује чак и током ембрионалног развоја: садржај CD34-позитивних ћелија у крви из пупчане врпце линеарно се смањује 5 пута у периоду од 20 недеља (крв за студију је добијена током превременог прекида трудноће) до 40 недеља гестације (период физиолошког порођаја), што је праћено паралелном, трајно растућом експресијом линеарних маркера цитодиференцијације.

Због недостатка стандардизованог приступа квантитативном одређивању ћелија прогенитора у узорцима крви из пупчане врпце, дебате о оптималној дози хематопоетских матичних ћелија из крви из пупчане врпце се настављају. Неки истраживачи сматрају да се број нуклеарних ћелија и мононуклеарних ћелија прерачунат на телесну тежину примаоца, односно њихова доза, може користити као критеријум за одабир узорака крви из пупчане врпце. Неки аутори сматрају да је минимални квантитативни праг CD34+ ћелија чак и за аутотрансплантацију ХСК 2 x 10 ⁶ /кг. Истовремено, повећање дозе хематопоетских ћелија на 5 x 10 ⁶ ћелија/кг (само 2,5 пута) већ обезбеђује повољнији ток раног посттрансплантационог периода, смањује учесталост инфективних компликација и скраћује трајање превентивне антибиотске терапије.

Према Е. Глукману и др. (1998), у онкохематологији услов за успешну трансплантацију ћелија пупчане врпце је уношење најмање 3,7 x 10 ⁷ нуклеарних ћелија на 1 кг телесне тежине примаоца. Када се доза хематопоетских матичних ћелија смањи на 1 x 10 ⁷ или мање нуклеарних ћелија на 1 кг телесне тежине пацијента, ризик од неуспеха трансплантације и рецидива рака крви нагло расте. Треба признати да је минимални број прогениторских ћелија неопходних за брзо обнављање хематопоезе након алотрансплантације ХСК још увек непознат. Теоретски, ово се може постићи употребом једне ћелије, али у клиничкој пракси трансплантације коштане сржи, брзо и стабилно прихватање је загарантовано трансфузијом најмање (1-3) x 10 ⁸ нуклеарних ћелија на 1 кг телесне тежине пацијента.

Недавна детаљна студија за одређивање оптималног броја ХСК у онкохематологији обухватила је посматрање пацијената у три групе, распоређених у зависности од садржаја CD34-позитивних ћелија у трансплантираном материјалу. Пацијентима прве групе је примењено (3-5) x 10⁶ ^ћелија /кг. Доза ХСК код пацијената друге групе била је (5-10) x 10⁶ ^ћелија /кг, а пацијентима треће групе је трансплантирано више од 10 x 10⁶ ^CD34 + ћелија/кг. Најбољи резултати су примећени у групи прималаца који су примили трансплантат са бројем CD34-позитивних ћелија једнаким (3-5) x 10⁶ ^/ кг. Са повећањем дозе трансплантираних ћелија изнад 5 x 10⁶ ^/ кг, нису откривене статистички значајне предности. У овом случају, веома висок садржај ХСК у трансплантату (> 10 x 10⁶ ^/ кг) повезан је са реинфузијом значајног броја резидуалних туморских ћелија, што доводи до рецидива болести. Директна веза између броја трансплантираних алогених ћелија прогенитора и развоја реакције калем-против-домаћина није утврђена.

Акумулирано светско искуство у трансплантацији крви из пупчане врпце потврђује њихов висок потенцијал репопулације. Стопа прихватања трансплантата крви из пупчане врпце корелира са бројем уведених ћелија са нуклеусом. Најбољи резултати се примећују код трансплантације од 3 x 10 ⁷ /кг, док је за коштану срж ова доза 2 x 10 ⁸ /кг. Према подацима координационих центара, крајем 2000. године, широм света је извршено 1200 трансплантација ћелија крви из пупчане врпце, углавном од сродних донора (83%). Очигледно је да крв из пупчане врпце треба размотрити као алтернативу коштаној сржи за трансплантацију пацијентима са хемобластозама.

Истовремено, неонатална природа пупчане врпце као извора хематопоетског ткива улива оптимизам због присуства функционалних карактеристика њених ХСЦ. Истовремено, само клиничко искуство може одговорити на питање довољности једног узорка крви из пупчане врпце за обнављање хематопоезе код одраслог примаоца са хематопоетском аплазијом. Трансплантација ћелија крви из пупчане врпце користи се у програмима лечења многих туморских и нетуморских болести: леукемије и мијелодиспластичних синдрома, не-Хоџкиновог лимфома и неуробластома, апластичне анемије, конгениталних Фанконијевих и Дајмонд-Блекфанових анемије, дефицита адхезије леукоцита, Баровог синдрома, Гунтерове болести, Хурлеровог синдрома, таласемије.

Имунолошки аспекти трансплантације хематопоетских ћелија из пупчане врпце заслужују пажљиву пажњу и посебну студију. Показано је да су у случају трансплантације матичних ћелија из пупчане врпце од донора са непотпуном HLA компатибилношћу, резултати трансплантације прилично задовољавајући, што, према ауторима, указује на нижу имунореактивност ћелија из пупчане врпце него коштане сржи.

Детаљна студија ћелијског састава крви из пупчане врпце открила је карактеристике како фенотипског спектра ефекторских ћелија имуног система, тако и њихове функционалне активности, што је омогућило да се крв из пупчане врпце сматра извором ХСЦ са релативно ниским ризиком од развоја реакције „калем против домаћина“. Међу знацима функционалне незрелости имунокомпетентних ћелија крви из пупчане врпце, потребно је напоменути неравнотежу у производњи цитокина и смањење осетљивости на цитокинску регулацију имуног одговора. Резултујућа инхибиција активности цитотоксичних лимфоцита сматра се фактором који доприноси формирању имунолошке толеранције на трансплантирано хематопоетско ткиво. У популацији лимфоцита крви из пупчане врпце, за разлику од периферне крви и коштане сржи одраслих донора, преовладавају неактивни, незрели лимфоцити и супресорске ћелије. Ово указује на смањену спремност Т-лимфоцита крви из пупчане врпце за имуни одговор. Важна карактеристика моноцитне популације ћелија крви из пупчане врпце је низак садржај функционално пуноправних и активних ћелија које презентују антиген.

С једне стране, ниска зрелост ефекторских ћелија имуног система у крви из пупчане врпце проширује индикације за њену употребу у клиници, јер ове карактеристике обезбеђују смањење интензитета имуног сукоба између ћелија донора и примаоца. Али, с друге стране, познато је постојање корелације између степена развоја реакције „калем против домаћина“ и антитуморског ефекта трансплантације, односно развоја ефекта „калем против леукемије“. У том смислу, спроведена је студија о антитуморској цитотоксичности ћелија из крви из пупчане врпце. Добијени резултати указују на то да, упркос заиста ослабљеном одговору имунокомпетентних ћелија из крви из пупчане врпце на стимулацију антигеном, лимфоцити који се првенствено активирају су природне убице и ћелије сличне убицама које активно учествују у механизмима спровођења антитуморске цитотоксичности. Поред тога, у крви из пупчане врпце пронађене су субпопулације лимфоцита са фенотиповима CD16+CD56+ и CD16"TCRa/p+. Претпоставља се да ове ћелије у свом активираном облику спроводе реакцију „калем против леукемије“.

У Институту за онкологију Академије медицинских наука Украјине, криопрезервиране хематопоетске ћелије из крви пупчане врпце примењене су на пацијенте оболеле од рака са перзистентном хематопоетском хипоплазијом услед хемо- и радиотерапије. Код таквих пацијената, трансплантација хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце прилично ефикасно је обновила депресивну хематопоезу, о чему сведочи перзистентно повећање садржаја зрелих формираних елемената у периферној крви, као и повећање индикатора који карактеришу стање ћелијског и хуморалног имунитета. Стабилност ефекта репопулације након трансплантације хематопоетских ћелија из крви пупчане врпце омогућава наставак зрачења и хемотерапије без прекида тока лечења. Постоје информације о већој ефикасности алотрансплантације матичних ћелија из крви пупчане врпце онкохематолошким пацијентима: годишњи ризик од рецидива туморске болести уз њихову употребу био је 25% у односу на 40% код пацијената са трансплантираном алогеном коштаном сржи.

Механизам деловања криопрезервираних матичних ћелија из пупчане врпце треба сматрати резултатом хуморалне стимулације хематопоезе примаоца, узроковане јединственом способношћу неонаталних ћелија за аутокрину производњу хематопоетских фактора раста, као и последицом привременог прихватања донорских ћелија (што доказује поуздано повећање садржаја феталног хемоглобина у периферној крви примаоца 7-15. дана након трансфузије у поређењу са почетним подацима). Одсуство посттрансфузионих реакција код прималаца пупчане врпце резултат је релативне толеранције њених имунокомпетентних ћелија, као и критеријум поузданости за биолошку адекватност криопрезервираног материјала.

Прогениторске ћелије убице Т-лимфоцита из крви пупчане врпце способне су за активацију под утицајем егзогене стимулације цитокинима, што се користи за развој нових ex vivo и in vivo метода за индуковање антитуморске цитотоксичности лимфоидних елемената трансплантата за накнадну имунотерапију. Поред тога, „незрелост“ генома имунокомпетентних ћелија из крви пупчане врпце омогућава им да се користе за побољшање антитуморске активности коришћењем метода молекуларног моделирања.

Данас је крв из пупчане врпце нашла широку примену првенствено у педијатријској хематологији. Код деце са акутном леукемијом, алотрансплантација хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце, у поређењу са алотрансплантацијом коштане сржи, значајно смањује учесталост болести калем-против-домаћина. Међутим, ово је праћено дужим периодом неутро- и тромбоцитопеније и, нажалост, вишом стопом морталитета након 100 дана након трансплантације. Дужи период опоравка нивоа гранулоцита и тромбоцита у периферној крви може бити последица недовољне диференцијације појединачних субпопулација CD34-позитивних ћелија крви из пупчане врпце, што доказује низак ниво апсорпције радиоактивног родамина и ниска експресија CD38 антигена на њиховој површини.

Истовремено, трансплантација хематопоетских матичних ћелија из крви пупчане врпце одраслим пацијентима, извршена због одсуства и компатибилног несродног донора коштане сржи и могућности мобилизације аутологних ХСК, показала је високо једногодишње преживљавање без рецидива у групи пацијената млађих од 30 година (73%). Проширење старосног распона прималаца (18-46 година) довело је до смањења преживљавања на 53%.

Квантитативна анализа ћелија са фенотипом CD34+ у коштаној сржи и крви из пупчане врпце открила је њихов већи (3,5 пута) садржај у коштаној сржи, али је у крви из пупчане врпце примећена значајна превласт ћелија са фенотипским профилом CD34+HLA-DR. Познато је да крвне ћелије са имунолошким маркерима CD34+HLA-DR пролиферишу активније од ћелија са имунофенотипом CD34+HLA-DR+, што је потврђено у експерименталним студијама раста дугорочне културе хематопоетских ћелија in vitro. Примитивни ћелијски прекурсори са фенотипом CD34+CD38 налазе се и у крви из пупчане врпце и у коштаној сржи, али ћелије крви из пупчане врпце са скупом маркера CD34+CD38 имају већу клоногену активност од хематопоетских ћелија истог фенотипа изолованих из коштане сржи одраслих донора. Поред тога, ћелије пупчане врпце са имунофенотипом CD34+CD38 пролиферишу брже као одговор на стимулацију цитокинима (IL-3, IL-6, G-CSF) и производе 7 пута више колонија у дугорочним културама него ћелије коштане сржи.

Банке матичних ћелија из пупчане врпце

За правилан развој нове области практичне медицине - трансплантације матичних ћелија из пупчане врпце, као и за спровођење трансплантација хематопоетских матичних ћелија коштане сржи, неопходно је имати широку мрежу банака крви, које су већ створене у САД и Европи. Домаће мреже банака крви из пупчане врпце обједињује Удружење банака Неткорд. Сврсисходност стварања међународног удружења банака крви из пупчане врпце одређена је чињеницом да је за обављање несродних трансплантација потребан велики број типизираних узорака крви из пупчане врпце, што омогућава избор ХЛА-идентичног донора. Само успостављање система банака са складиштењем узорака крви различитих ХЛА типова може заиста решити проблем проналажења потребног донора. Организација таквог система банака крви из пупчане врпце захтева претходни развој етичких и правних норми, о којима се тренутно расправља на међународном нивоу.

Да би се у Украјини створиле банке крви из пупчане врпце, мора се разрадити читав низ прописа и докумената.

Пре свега, то су питања стандардизације метода прикупљања, фракционисања и замрзавања крви из пупчане врпце. Потребно је регулисати правила прикупљања крви из пупчане врпце у породилиштима у складу са захтевима медицинске етике, одредити минималну запремину крви из пупчане врпце која обезбеђује успешну трансплантацију. Потребно је упоредити и стандардизовати различите критеријуме за процену квалитета и количине хематопоетских ћелија прогенитора, као и методе HLA типизације и дијагностичке методе за генетске и заразне болести које се могу пренети током инфузије ћелија крви из пупчане врпце, како би се утврдили заједнички критеријуми за избор здравих донора. Такође је вредно размотрити питања стварања одвојених складишта за серум, ћелије и ДНК добијене из крви из пупчане врпце.

Апсолутно је неопходно организовати компјутерску мрежу података о крви из пупчане врпце ради повезивања са регистрима донора коштане сржи. За даљи развој ћелијске трансплантологије, неопходно је развити посебне протоколе за поређење резултата трансплантације крви из пупчане врпце и коштане сржи од ХЛА-идентичних рођака и несродних донора. Стандардизација документације, укључујући информисани пристанак родитеља, као и обавештавање мајке или рођака о генетским и/или заразним болестима откривеним код детета, може помоћи у решавању етичких и правних проблема клиничке употребе ћелија крви из пупчане врпце.

Одлучујући услов за развој ћелијске трансплантологије у Украјини биће усвајање Националног програма за донирање матичних ћелија и развој међународне сарадње са другим земљама путем Светске асоцијације донора коштане сржи (WMDA), Националног програма за донирање коштане сржи САД (NMDP) и других регистара.

Сумирајући још увек кратку историју развоја трансплантације хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце, напомињемо да су прве претпоставке о могућности коришћења крви из пупчане врпце у клиници, изражене још почетком 70-их, потврђене 80-их година резултатима експерименталних студија на животињама, а 1988. године извршена је прва трансплантација хематопоетских ћелија из крви из пупчане врпце на човека, након чега је почела да се ствара глобална мрежа банака крви из пупчане врпце. За 10 година, број пацијената са трансплантираним хематопоетским ћелијама из крви из пупчане врпце приближио се броју 800. Међу њима су били пацијенти са различитим болестима туморске (леукемија, лимфом, солидни тумори) и нетуморске (урођене имунодефицијенције, анемија, болести повезане са метаболичким поремећајима) природе.

Садржај раних и посвећених ћелијских прекурсора у крви из пупчане врпце је већи него у периферној крви одрасле особе. По броју јединица које формирају колоније гранулоцита-макрофага и њиховом пролиферативном потенцијалу, крв из пупчане врпце значајно премашује периферну крв одраслих чак и након уношења фактора раста. У дугорочним ћелијским културама in vitro забележена је већа пролиферативна активност и виталност ћелија крви из пупчане врпце него ћелија коштане сржи. Критични моменти у трансплантацији матичних ћелија из крви из пупчане врпце су број и хематопоетски потенцијал ћелија са нуклеом, присуство цитомегаловирусне инфекције, HLA компатибилност донора и примаоца, телесна тежина и старост пацијента.

Међутим, трансплантацију матичних ћелија из пупчане врпце треба размотрити као алтернативу трансплантацији коштане сржи за лечење тешких болести крви, пре свега код деце. Клинички проблеми трансплантације ћелија из пупчане врпце се постепено решавају - већ постоје прилично ефикасне методе за сакупљање, одвајање и криопрезервацију ћелија из пупчане врпце, обезбеђују се услови за формирање банака крви из пупчане врпце, а усавршавају се и методе за испитивање ћелија са нуклеом. 3% раствор желатина и 6% раствор хидроксиетил скроба треба сматрати оптималним за одвајање током набавке хематопоетских матичних ћелија из пупчане врпце у великим размерама приликом стварања банака.

П. Перехрестенко и коаутори (2001) с правом примећују да трансплантација матичних ћелија из пупчане врпце треба да заузме своје право место у комплексу терапијских мера за превазилажење хематопоетских депресија различите генезе, будући да матичне ћелије из пупчане врпце имају низ значајних предности, међу којима су најважније релативна једноставност њиховог набављања, одсуство ризика за донора, ниска контаминација неонаталних ћелија вирусима и релативно ниска цена трансплантације. Неки аутори истичу да је трансплантација ћелија из пупчане врпце ређе праћена компликацијама повезаним са реакцијом калем-против-домаћина него трансплантација ћелија коштане сржи, што је, по њиховом мишљењу, последица слабе експресије HLA-DR антигена на ћелијама из пупчане врпце и њихове незрелости. Међутим, главна популација нуклеарних ћелија у крви из пупчане врпце су Т лимфоцити (CD3-позитивне ћелије), чији је садржај око 50%, што је 20% мање него у периферној крви одрасле особе, али су фенотипске разлике у субпопулацијама Т ћелија из ових извора незнатне.

Међу факторима који директно утичу на стопу преживљавања код трансплантације матичних ћелија из пупчане врпце, вреди истаћи старост пацијената (најбољи резултати се примећују код прималаца старости од једне до пет година), рано откривање болести и облик леукемије (ефикасност је знатно већа код акутне леукемије). Од великог значаја су доза нуклеарних ћелија из пупчане врпце, као и њихова ХЛА компатибилност са примаоцем. Није случајно да анализа клиничке ефикасности трансплантације ХСК из пупчане врпце у онкохематологији показује најбоље резултате лечења када се користе сродне трансплантације: једногодишње преживљавање без рецидива у овом случају достиже 63%, док код несродне трансплантације - само 29%.

Дакле, присуство великог броја матичних ћелија у крви из пупчане врпце и висок капацитет репопулације неонаталних хематопоетских матичних ћелија омогућавају њихову употребу за алогеничку трансплантацију код онкохематолошких пацијената. Међутим, треба напоменути да је рекапитулација хематопоезе након трансплантације хематопоетских ћелија из крви из пупчане врпце „развучена у времену“: обнављање садржаја неутрофила у периферној крви се обично примећује до краја 6. недеље, а тромбоцитопенија обично нестаје након 6 месеци. Поред тога, незрелост хематопоетских ћелија из крви из пупчане врпце не искључује имунолошке сукобе: тешка акутна и хронична болест калем-против-домаћина примећује се код 23% односно 25% прималаца. Рецидиви акутне леукемије до краја прве године након трансплантације ћелија из крви из пупчане врпце примећени су у 26% случајева.

[ 10 ], [ 11 ]