Кариотипизација

За проучавање хромозома најчешће се користе краткорочне хемокултуре, ћелије коштане сржи и фибробластне културе. Крв са антикоагулантом достављена у лабораторију се центрифугира да би се еритроцити седиментирали, а леукоцити се инкубирају у медијуму за култивацију 2-3 дана. Узорку крви се додаје фитохемаглутинин, јер убрзава аглутинацију еритроцита и стимулише деобу лимфоцита. Најпогоднија фаза за проучавање хромозома је метафаза митозе, па се колхицин користи да би се зауставила деоба лимфоцита у овој фази. Додавање овог лека у културу доводи до повећања удела ћелија у метафази, односно у фази ћелијског циклуса када су хромозоми највидљивији. Сваки хромозом се реплицира (производи своју копију) и, након одговарајућег бојења, видљив је као две хроматиде причвршћене за центромеру, односно централну констрикцију. Ћелије се затим третирају хипотоничним раствором натријум хлорида, фиксирају и боје.

За бојење хромозома најчешће се користе Романовски-Гимза боја, 2% ацетакармин или 2% ацетарсеин. Оне боје хромозоме у целини, равномерно (рутинска метода) и могу се користити за откривање нумеричких аномалија људских хромозома.

Да би се добила детаљна слика структуре хромозома, идентификовали (дефинисали) појединачни хромозоми или њихови сегменти, користе се различите методе диференцијалног бојења. Најчешће коришћене методе су Гимза, као и Г- и Q-бандинг. Приликом испитивања препарата микроскопијом дуж дужине хромозома, открива се низ обојених (хетерохроматин) и необојених (еухроматин) трака. Природа попречног пругања добијеног на овај начин омогућава идентификацију сваког хромозома у скупу, пошто су смењивање трака и њихове величине строго индивидуалне и константне за сваки пар.

Метафазне плоче појединачних ћелија се фотографишу. Појединачни хромозоми се исецају са фотографија и лепе по реду на лист папира; ова слика хромозома се назива кариотип.

Употреба додатног бојења, као и нове методе за добијање хромозомских препарата који омогућавају истезање хромозома у дужини, значајно повећавају тачност цитогенетске дијагностике.

Развијена је посебна номенклатура за опис људског кариотипа. Нормални кариотип мушкарца и жене означен је као 46, XY и 46, XX, респективно. Код Дауновог синдрома, који карактерише присуство додатног хромозома 21 (трисомија 21), кариотип жене се описује као 47, XX 21+, а мушкарца као 47, XY, 21+. У присуству структурне аномалије хромозома, потребно је назначити измењени дуги или кратки крак: слово p означава кратки крак, q означава дуги крак, а t означава транслокацију. Дакле, у случају делеције кратког крака хромозома 5 (синдром cri du chat), женски кариотип се описује као 46, XX, 5p-. Мајка детета са транслокацијским Дауновим синдромом, носилац уравнотежене транслокације 14/21, има кариотип 45, XX, t(14q; 21q). Транслокацијски хромозом настаје фузијом дугих кракова хромозома 14 и 21, а кратки кракови се губе.

Сваки крак је подељен на регионе, који су затим подељени на сегменте, а оба су означена арапским бројевима. Центромера хромозома је почетна тачка за бројање региона и сегмената.

Дакле, за топографију хромозома се користе четири ознаке: број хромозома, симбол крака, број региона и број сегмента унутар региона. На пример, унос 6p21.3 значи да говоримо о хромозому 6 6. пара, његовом кратком краку, региону 21, сегменту 3. Постоје и додатни симболи, посебно pter - крај кратког крака, qter - крај дугог крака.

Цитогенетска метода истраживања омогућава откривање делеција и других промена у хромозомима величине само приближно 1 милион база (нуклеотида).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]