Инфективна мононуклеоза: антитела на Епштајн-Баров вирус у крви

Инфективна мононуклеоза је уобичајена системска лимфопролиферативна болест коју најчешће изазива Епштајн-Баров вирус. Toxoplasma gondii и други вируси (CMV, вирус хумане имунодефицијенције и хумани херпес вирус типа 6, препознат као узрок изненадне егзантеме) могу изазвати клинички сличне болести. Ови исти етиолошки агенси могу вероватно изазвати развој синдрома хроничног умора.

Епштајн-Баров вирус је херпес вирус који има тропизам за Б-лимфоците и дуго перзистира у ћелијама домаћина као латентна инфекција. Распрострањен је широм света. По структури и величини, Епштајн-Баров вирус се не разликује од других херпес вируса, али се значајно разликује од њих по антигеним својствима. Вирус има мембрански антиген (MA - мембрански антиген), нуклеарни антиген (EBNA - Епштајн-Барисов нуклеински антиген) и антиген вирусне капсиде (VCA - вирусни капсидни антиген).

До инфекције долази када се вирус преноси пљувачком. Када Епштајн-Баров вирус уђе у организам, он инфицира фарингеални епител, изазивајући упалу и грозницу - типичне клиничке знаке почетка инфективне мононуклеозе. Вирус је строго лимфотропан, везујући се за C3α рецептор ћелијске мембране Б-лимфоцита, изазива пролиферацију поликлоналних Б-лимфоцита са одговарајућим повећањем крајника, системском лимфаденопатијом и спленомегалијом. Б-лимфоцити се трансформишу (стичу способност бесконачног дељења), а у одсуству адекватног ћелијског имуног одговора, овај процес може еволуирати у јасно малигни (на пример, код X-везаног лимфопролиферативног синдрома). Ако фактори ћелијског имунитета контролишу репликацију Епштајн-Баровог вируса у организму, клинички симптоми инфективне мононуклеозе постепено нестају.

Као и други херпесвируси, ЕПВ може да перзистира као латентна инфекција (његова ДНК се налази у језгру малог броја Б лимфоцита). Повремена асимптоматска реактивација инфекције је честа, при чему око 20% здравих младих одраслих особа излучује ЕПВ у пљувачки. Особе са оштећеним ћелијским имунитетом (нпр. АИДС, атаксија-телангиектазија, примаоци трансплантата) могу развити очигледну реактивну инфекцију са длакавом леукоплакијом, интерстицијалним пнеумонитисом или моноклонским Б-ћелијским лимфомом. ЕПВ је имплициран у етиологији назофарингеалног карцинома и Буркитовог лимфома.

Једна од манифестација инфективне мононуклеозе је појава атипичних лимфоцита у периферној крви (до 10% од укупног броја лимфоцита). Атипични лимфоцити се детектују у крви од почетка периода клиничких манифестација инфекције. Њихов садржај у крви достиже врхунац до краја 2. или почетка 3. недеље и може остати на овом нивоу до 1,5-2 месеца, потпуни нестанак се обично јавља до почетка 4. месеца од почетка болести. Присуство атипичних лимфоцита је релативно неосетљив знак инфекције изазване Епштајн-Баровим вирусом, али има општу специфичност од око 95%.

Пролиферација поликлоналних Б лимфоцита код инфекције изазване Епштајн-Баровим вирусом генерише велики број различитих аутоантитела у телу пацијента, као што су IgM анти-i (хладни аглутинин), реуматоидни фактор, антинуклеарна антитела. Већина необичних Ig који се појављују код инфективне мононуклеозе називају се Пол-Банелова хетерофилна антитела. Ова антитела припадају класи IgM, имају афинитет према овчјим и коњским еритроцитима и нису усмерена ни на један антиген Епштајн-Баровог вируса. Хетерофилна антитела су случајни производ пролиферације Б-лимфоида (изазване Епштајн-Баровим вирусом), појављују се у првој недељи инфективне мононуклеозе и постепено нестају током опоравка, обично се не детектују након 3-6 месеци.

Како почетна акутна фаза инфекције постаје латентна, геноми вируса Епштајн-Бар (јединствени антигени) се појављују у великим количинама у свим ћелијама, а нуклеарни антиген се ослобађа у животну средину. Као одговор на антиген, синтетишу се специфична антитела - вредни маркери стадијума болести. Убрзо након инфекције, Б-лимфоцити детектују рани антиген (ЕА), протеин неопходан за репликацију вируса Епштајн-Бар (а не структурну вирусну компоненту). У телу пацијента се синтетишу антитела класе IgM и IgG на рани антиген. Заједно са комплетним вирионом вируса Епштајн-Бар, појављују се вирусни капсидни антигени (VCA) и мембрански антиген (MA). Како се инфективни процес смирује, мали проценат Б-лимфоцита заражених вирусом Епштајн-Бар избегава имунолошко уништење и задржава вирусни геном у латентном облику. Нуклеарни антиген вируса Епштајн-Бар (EBNA) је одговоран за његову дупликацију и преживљавање.

Лабораторијски тестови могу открити антитела на различите антигене.

Од серолошких метода за дијагностиковање инфективне мононуклеозе, најчешћа је Пол-Банелова реакција (аглутинација), усмерена на идентификацију хетерофилних антитела у серуму. Титар хетерофилних антитела од 1:224 или више у крвном серуму пацијента препознаје се као дијагностички значајан, потврђујући дијагнозу инфективне мононуклеозе. Хетерофилна аглутинација је позитивна код 60% младих људи након 2 недеље и код 90% након 4 недеље од почетка клиничких манифестација болести. Стога, за дијагнозу инфективне мононуклеозе потребно је спровести неколико студија: у првој недељи болести (реакција може бити негативна) и након 1-2 недеље (реакција може постати позитивна). Садржај хетерофилних антитела се смањује на крају акутног периода инфективног процеса, али се њихов титар може одредити у року од 9 месеци након појаве клиничких симптома. Пол-Банелова реакција може прећи из позитивне у негативну, чак и на позадини резидуалних хематолошких и клиничких симптома код пацијента. Осетљивост методе код одраслих је 98%, специфичност - 99%. Код деце са инфективном мононуклеозом млађе од 2 године, хетерофилна антитела се детектују само код 30% пацијената, у узрасту од 2-4 године - код 75%, преко 4 године - више од 90%. Осетљивост методе код деце је мања од 70%, специфичност - 20%. Смањење, а затим поновно повећање титра хетерофилних антитела може се јавити као одговор на другу инфекцију (најчешће код вирусних инфекција горњих дисајних путева). Пол-Банелова реакција је неспецифична за Епштајн-Баров вирус. Титар хетерофилних антитела не реагује унакрсно и не корелира са специфичним антителима на Епштајн-Баров вирус, такође нема корелације са тежином болести. Тест је бескористан за дијагностиковање хроничне инфективне мононуклеозе (позитиван је у просеку само код 10% пацијената).

Титри од 1:56 и мање могу се наћи код здравих људи и код пацијената са другим болестима (реуматоидни артритис, рубеола). Лажно позитивни резултати теста су веома ретки.

Тренутно се метод „једне тачке“ (аглутинација на плочици) користи за одређивање антитела на овчије црвене крвне зрнце; у почетку се користи као скрининг тест. По осетљивости је упоредив са Пол-Банеловом реакцијом. Тестови на плочицама могу бити лажно позитивни у приближно 2% студија (код леукемије, малигног лимфома, маларије, рубеоле, вирусног хепатитиса, карцинома панкреаса), а лажно негативни код одраслих - у 5-7% случајева.

Треба напоменути да је асортиман дијагностичких тест система које производе компаније на основу одређивања титра антитела веома широк, стога је потребно фокусирати се на дијагностички титар антитела назначен у упутствима за тест системе.

Уколико се не открију хетерофилна антитела и клиничка слика болести одговара инфективној мононуклеози, потребно је испитати крвни серум на специфична антитела класе IgM и IgG. За откривање специфичних антитела на вирус Епштајн-Бар користе се методе индиректне имунофлуоресценције (омогућавају откривање антитела на антигене ЕА и VCA), антикомплементне имунофлуоресценције (открива антитела на антигене ЕА, VCA и EBNA) и ELISA.

Антитела на компоненту Д антигена ЕА (анти-ЕА-Д) појављују се чак и током латентног периода примарне инфекције и брзо нестају са опоравком.

Антитела на компоненту Р антигена ЕА (анти-ЕА-Р) могу се детектовати 3-4 недеље након клиничких манифестација болести. Она перзистирају у крвном серуму око годину дана и често се детектују код атипичне или продужене инфективне мононуклеозе. Ова антитела се обично налазе код Буркитовог лимфома.

Антитела на VCA класу IgM (анти-VCA IgM) јављају се веома рано, обично пре клиничких симптома, откривају се на почетку болести у 100% случајева. Високи титри се јављају у 1-6 недељама од почетка инфекције, почињу да се смањују од 3. недеље и обично нестају после 1-6 месеци. Анти-VCA IgM су скоро увек присутни у серуму током активне инфекције, тако да је метод њиховог откривања веома осетљив и специфичан за акутну епизоду инфективне мононуклеозе.

Антитела на VCA класу IgG (анти-VCA IgG) могу се појавити рано (у 1-4 недељи), њихов број достиже врхунац до 2. месеца болести. На почетку болести, откривају се у 100% случајева. Само 20% пацијената показује 4-струко повећање титра приликом испитивања упарених серума. Титар се смањује током опоравка, али је детектован неколико година након инфекције, тако да је бескористан за дијагностиковање инфективне мононуклеозе. Присуство анти-VCA IgG указује на стање након инфекције и имунитет.

Антитела на ЕБНА (анти-ЕБНА) појављују се последња, ретко су присутна у акутној фази болести. Њихов садржај се повећава током периода опоравка (у року од 3-12 месеци), могу остати у крви много година након болести. Одсуство анти-ЕБНА у присуству анти-ВЦА ИгМ и анти-ЕА ИгМ указује на тренутну инфекцију. Детекција анти-ЕБНА након претходно негативне реакције указује на постојећу инфекцију. Коришћењем ЕЛИСА методе могуће је истовремено утврдити присуство анти-ЕБНА класа ИгМ и ИгГ. Ако је количина анти-ЕБНА ИгМ већа од анти-ЕБНА ИгГ, треба разговарати о акутној инфекцији, са супротним односом - претходно прележаној.

Присуство једног или више следећих знакова указује на акутну примарну инфекцију:

• анти-ВЦА ИгГ (открива се рано, а касније се садржај смањује);
• висок титар (више од 1:320) или 4 пута веће повећање титра анти-VCA IgG током тока болести;
• пролазно повећање титра анти-ЕА-Д (1:10 или више);
• рани анти-VCA IgG без анти-EBNA, а касније појава анти-EBNA.

Акутна или примарна инфекција изазвана вирусом Епштајн-Бар се искључује ако се титри анти-ВЦА ИгГ и анти-ЕБНА у крвном серуму не мењају када се динамички проучавају (током акутног периода и током опоравка).

Перзистентно присуство раног антигена и анти-VCA IgG у високим титрима указује на хроничну фазу инфекције.

Детекција антитела на вирус Епштајн-Бар се користи за дијагностиковање инфективне мононуклеозе и хроничних инфекција изазваних вирусом Епштајн-Бар.

Антитела на вирус Епштајн-Бар могу се открити код следећих болести: секундарна имунодефицијенција, укључујући ХИВ инфекцију, назофарингеални карцином, Буркитов лимфом, ЦМВ инфекцију, сифилис, Лајмску болест, бруцелозу итд.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ]