Имунофенотипизација хемобластоза

Значајан напредак у хематолошким истраживањима последњих година повезан је са употребом савремених имунолошких метода и аутоматизованих средстава за анализу и сортирање ћелија периферне крви и коштане сржи - проточних цитометара. Традиционалне морфолошке и цитохемијска испитивања ћелија супстрата болести (крв, црвена коштана срж, лимфни чворови, слезина итд.) у многим случајевима, посебно код лимфопролиферативних болести, не дозвољавају нам да идентификујемо пуну разноликост варијанти међу морфолошки сличним облицима и утврдимо извор порекла патолошког клона. Ови проблеми се могу решити само проучавањем имунолошких карактеристика ћелија. Свака фаза диференцијације хематопоетских ћелија одговара сопственом скупу антигена, који се према међународној класификацији називају диференцијација и подељени су у кластере диференцијације, означене као CD.

Код неопластичних промена, блок диференцијације може се јавити у било којој фази нормалног развоја ћелија, што резултира формирањем клона патолошких ћелија које одређују супстрат болести и имају исте имунолошке (или фенотипске) карактеристике. Спровођењем студија ових маркера на ћелијама могуће је утврдити ком облику и варијанти болести одговарају, односно, на основу имунолошког фенотипа ћелија, спровести диференцијалну дијагностику, што је најтеже код лимфопролиферативних болести, јер су главне ћелије патолошког супстрата болести морфолошки готово идентичне ћелије.

Фенотипизација омогућава коришћење моноклонских антитела за типизацију бластних и зрелих крвних ћелија мијело-, моно-, лимфоцитне серије присуством диференцијационих антигена (рецептора) у ћелијском зиду. Одељак „Процена имуног статуса организма“ делимично описује карактеристике и дијагностичку вредност проучавања ћелијских маркера; у наставку је дат кратак опис антигенских маркера ћелија у вези са дијагнозом хемобластоза. Следећи антигени (маркери) могу се детектовати на мембранама крвних ћелија и црвене коштане сржи.

• CD2 је мономерни трансмембрански гликопротеин. Присутан је на површини свих Т-лимфоцита који циркулишу у крви и на неким NK-лимфоцитима. CD2 је укључен у процес алтернативне активације Т-лимфоцита. Детекција CD2 помоћу моноклонских антитела у клиничкој пракси се користи за фенотипизацију акутне Т-ћелијске леукемије, лимфома, хроничних инфламаторних и имунодефицијентних стања.
• CD3 је протеински комплекс повезан са антиген-специфичним Т-ћелијским рецептором, главни је функционални маркер Т-лимфоцита. Олакшава пренос активационог сигнала са мембране на ћелијску цитоплазму. Одређивање CD3 је индиковано за дијагнозу акутне Т-ћелијске леукемије, лимфома (CD3 се не експресује у не-Т-ћелијским лимфоидним неоплазмама) и имунодефицијенцијалних болести.
• CD4 је трансмембрански гликопротеин који експресује субпопулација Т-хелпера (индуктора), који чине 45% лимфоцита периферне крви. У раним фазама развоја лимфоцита у тимусу, CD4 антигене, као и CD8, експресују сви кортикални лимфоцити. Медуларни тимоцити, чији је фенотип сличан зрелим CD4+ Т-ћелијама периферне крви (Т-хелперима), већ експресују или CD4 или CD8 рецепторе. У периферној крви, до 5% ћелија носи и CD4 и CD8 маркере. Мања експресија CD4 је могућа на неким ћелијама моноцитне серије. CD4 се експресује у већини случајева Т-ћелијских лимфома, укључујући микозис фунгоидес, као и код HTLV-асоциране Т-ћелијске леукемије (HTLV - хумани Т-лимфотропни вирус).
• CD5 је једноланчани гликопротеин присутан на свим зрелим Т лимфоцитима и већини тимоцита, а слабо га експресују Б лимфоцити. CD5 се детектује на неопластичним ћелијама Б-ћелијске хроничне лимфоцитне леукемије и центроцитног лимфома. Код других врста малигних лимфоидних болести - фоликуларног лимфома, леукемије длакавих ћелија, лимфома великих ћелија - CD5 се не експресује.
• CD7 је једноланчани протеин, најранији маркер диференцијације Т-ћелија. Експримирају га про-Т-лимфоцити чак и пре њихове миграције у тимус. CD7 се детектује на већини NK ћелија, слаба експресија је примећена на моноцитима. Б-лимфоцити и гранулоцити не садрже овај антиген. Одређивање CD7 се користи за дијагностиковање лимфома, дечје Т-ћелијске лимфобластне леукемије.
• CD8 је протеин који се састоји од два полипептидна ланца повезана дисулфидним мостовима. Експресује га субпопулација цитотоксичних и супресорских Т лимфоцита, који чине 20-35% лимфоцита периферне крви. Овај антиген такође експресују NK лимфоцити, кортикални тимоцити, 30% медуларних тимоцита и субпопулација ћелија црвене коштане сржи. CD8 се проучава да би се квантификовао садржај Т супресора (видети одељак „Супресорски Т лимфоцити у крви“ изнад).

• CD10 је ендопептидаза повезана са ћелијском мембраном. CD10 експресују млади облици B лимфоцита и субпопулација кортикалних лимфоцита. CD10 експресују све ALL ћелије.
• CD11c се експресује на ћелијској мембрани макрофагима, моноцитима, гранулоцитима, NK ћелијама и ћелијама длакавоћелијске леукемије.
• CD13 је гликопротеин који експресују ћелије мијеломоноцитне лозе (прогениторске ћелије, неутрофили, базофили, еозинофили, моноцити и ћелије мијелоидне леукемије). Одсутан је у Т и Б лимфоцитима, еритроцитима и тромбоцитима.
• CD14 је површински мембрански гликопротеин. Углавном га експресују моноцити и макрофаги. CD14 се детектује на више од 95% моноцита у периферној крви и коштаној сржи. Јака експресија CD14 се примећује код акутне мијелобластне леукемије. Овај антиген се не експресује код акутне и хроничне лимфобластне леукемије.
• CD15 је олигосахарид. Учествује у фагоцитози и хемотаксији. Овај антиген је присутан на површини зрелих гранулоцита и Березовски-Штернбергових ћелија. Експресија CD15 антигена је откривена код Хоџкинове болести. Код не-Хоџкинових лимфома, CD15 се не детектује у већини случајева.
• CD16 се експресује на површини гранулоцита, моноцита, макрофага и NK ћелија. Сви лимфоцити који експресују овај антиген имају способност ћелијске цитотоксичности зависне од антитела. CD16 се одређује током типизације хроничних мијелоцитних леукемија, како би се окарактерисале NK ћелије.
• CD19 је гликопротеин присутан на свим периферним Б лимфоцитима и свим прекурсорима Б-ћелија. Одсутан је из плазма ћелија. То је најранији маркер Б ћелија и игра важну улогу у регулацији активације и пролиферације Б-ћелија. CD19 се експресује на свим неопластичним ћелијама акутне леукемије Б-ћелијског порекла и такође је присутан у неким облицима акутне монобластне леукемије.
• CD20 је негликозиловани протеин. У онтогенези Б-лимфоцита, антиген CD20 се појављује након CD19 у фази пре-Б-ћелијске диференцијације лимфоцита. Одсутан је из плазма мембране плазма ћелија. Експресује се код ALL, хроничне лимфоцитне леукемије Б-ћелија, леукемије длакавих ћелија, Буркитовог лимфома и веома ретко код акутне монобластне леукемије.
• CD21 је гликопротеин присутан у значајним количинама на Б-лимфоцитима у лимфоидним органима и у малим количинама на Б-ћелијама у периферној крви. CD21 је рецептор за Епштајн-Баров вирус.
• CD22 је протеин који се састоји од два полипептидна ланца. Експримира се на мембрани већине Б лимфоцита, укључујући ћелије прекурсоре (пролимфоците). Антиген се не експресује на Б лимфоцитима (плазма ћелијама) након њихове активације. Најизраженија експресија CD22 је детектована на ћелијама код длакавоћелијске леукемије, слаба - код мијелоидне леукемије и не-Т-ћелијске АЛЛ.
• CD23 је гликопротеин који у много већој мери експресују активирани периферни Б лимфоцити крви. CD23 посредује у IgE-зависној цитотоксичности и фагоцитози макрофага и еозинофила.
• CD25 је једноланчани гликопротеин идентификован као рецептор ниског афинитета за IL-2. Овај рецептор се експресује на активираним Т лимфоцитима и, у мањој густини, на активираним Б ћелијама. У периферној крви здравих особа, антиген је присутан на више од 5% лимфоидних ћелија.
• CD29 је фибронектински рецептор. Широко је распрострањен у ткивима и експресују га леукоцити. Детекција CD29 на периферним крвним ћелијама се користи за типизацију субпопулације Т ћелија са CD4+CD29+ фенотипом, које се називају помоћници типа 2 (Th2). Ове ћелије учествују у хуморалном имунолошком одговору производњом лимфокина.
• CD33 је трансмембрански гликопротеин. Присутан је на површини ћелија мијелоидног и моноцитног серијала. Налази се на површини моноцита и, у мањој мери, гранулоцита у периферној крви. Приближно 30% ћелија црвене коштане сржи експресује CD33, укључујући мијелобласте, промијелоците и мијелоците. Антиген је одсутан из мембрана плурипотентних матичних ћелија. Одређивање CD33 се користи за карактеризацију ћелија код леукемија мијелоидног порекла. Ћелије леукемије лимфоидног и еритроидног порекла не експресују CD33.
• CD34 је фосфогликопротеин који експресују хематопоетске прогениторске ћелије, укључујући монопотентне матичне ћелије. Најизраженија експресија Ag се примећује код раних прогениторских ћелија; како ћелије сазревају, експресија маркера се смањује. CD34 се такође налази на ендотелним ћелијама. Одређивање CD34 се користи за карактеризацију ћелија код акутних мијелобластних и лимфобластних леукемија. Код хроничних лимфоцитних леукемија и лимфома, експресија CD34 антигена се не детектује.

• CD41a се експресује тромбоцитима и мегакариоцитима. Моноклонална антитела за детекцију CD41a се користе за дијагнозу мегакариобластне леукемије. Код Гланцманове тромбастеније, експресија овог антигена је одсутна или значајно потиснута.
• CD42b је мембрански гликопротеин који се састоји од два полипептидна ланца. Маркер се детектује на површини тромбоцита и мегакариоцита. У клиничкој пракси, детекција CD42b се користи за дијагнозу тромбоцитопатије - Бернар-Сулијеовог синдрома.
• CD45RA припада класи трансмембранских гликопротеина. То је уобичајени леукоцитни антиген. Експримира се на ћелијској мембрани Б лимфоцита, у мањој мери Т лимфоцита и на зрелим медуларним тимоцитима. Маркер се не експресује гранулоцитима.
• CD45RO је нискомолекуларни изоформ CD45RA, уобичајеног леукоцитарног антигена. Детектује се на Т ћелијама (меморијски Т лимфоцити), субпопулацији Б лимфоцита, моноцитима и макрофагима. Моноклонална антитела на CD45RO интерагују са већином тимоцита, субпопулацијом мирујућих CD4+ и CD8+ Т лимфоцита и зрелим активираним Т ћелијама. Ћелије мијеломоноцитног порекла, гранулоцити и моноцити такође носе овај антиген. Детектује се код центробластичних и имунобластичних лимфома.
• CD46 је О-гликозиловани димер. Широко је распрострањен у ткивима и експресују га Т и Б лимфоцити, моноцити, гранулоцити, NK ћелије, тромбоцити, ендотелне ћелије, фибробласти, али је одсутан на површини црвених крвних зрнаца. CD46 пружа заштиту ткива од комплемента.
• CD61 је тромбоцитни антиген. Експримиран је на тромбоцитима периферне крви и црвене коштане сржи, као и на мегакариоцитима и мегакариобластима. Његово одређивање се користи као маркер код акутне мегакариобластне леукемије. Експресија антигена је одсутна или је потиснута код пацијената са Гланцмановом тромбастенијом.
• CD95, такође назван Fas или APO-1, је трансмембрански гликопротеин, члан породице рецептора фактора туморске некрозе. Експримира се у значајним количинама на Т лимфоцитима (CD4+ и CD8+) у периферној крви и, у мањој мери, на Б лимфоцитима и NK ћелијама. Овај антиген се такође експресује на гранулоцитима, моноцитима, ћелијама ткива и неопластичним ћелијама. Везивање CD95 за Fas лиганд (CD95L) индукује апоптозу у ћелијама.
• CD95L, или Fas лиганд, је мембрански протеин који припада породици рецептора фактора некрозе тумора. Овај антиген експресују цитотоксични Т лимфоцити, NK ћелије и веома често туморске ћелије; он је главни индуктор апоптозе у ћелијама.
• HLA-DR је мономорфна детерминанта молекула класе II главног комплекса хистокомпатибилности човека (HLA). Маркер се експресује на Лангерхансовим ћелијама, дендритичним ћелијама лимфоидних органа, одређеним врстама макрофага, B лимфоцитима, активираним T ћелијама и ћелијама тимусног епитела. Проучавање овог маркера се користи за квантитативно одређивање активираних T лимфоцита са CD3+ HLA-DR+ фенотипом.

Коришћењем различитог избора моноклонских антитела на маркере, могуће је створити фенотипски портрет ћелија карактеристичних за дати облик леукемије.

Поред употребе метода имунофенотипизације за дијагностику и диференцијалну дијагностику хемобластоза, посебно значајном се показала њихова употреба у процесу лечења ради процене стања ремисије и резидуалне популације леукемијских ћелија. Познавање фенотипског „портрета“ бластних ћелија током периода дијагнозе, ови маркери омогућавају детекцију ћелија леукемијског клона током периода ремисије, а повећањем њиховог броја - предвиђање развоја рецидива много пре (1-4 месеца) појаве његових клиничких и морфолошких знакова.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]